微生物设计实验心得体会如何写 微生物设计实验心得体会如何写范文(7篇)

从某件事情上得到收获以后，写一篇心得体会，记录下来，这么做可以让我们不断思考不断进步。那么你知道心得体会如何写吗？下面我给大家整理了一些心得体会范文，希望能够帮助到大家。

关于微生物设计实验心得体会如何写一

一、联系教学内容，加强实验教学，培养学生的实验能力，强化学生的科技意识。

二、认真安排实验，按要求及时把实验通知单送达实验老师。

三、加强对学生的实验室纪律、安全、卫生方面的教育，确保学生的身心健康。

四、要求学生认真完成实验报告册，认真分析实验结果，及时总结经验和教训，存在问题，及时改进。

五、与实验老师密切配合，相互合作，共同辅导学生实验，确保实验教学顺利完成。

六、本学期实验进度安排表：

周次、材料、教材年级、备注;

第二周、发酵瓶，纱布，榨汁机，葡萄，酵母菌，醋酸菌，恒温箱，重铬酸钾，烧杯果酒和果醋的制作、选修1、高二年级、学生实验

第三周、小桶2个，两种不同颜色的彩球20个性状分离比的模拟、必修2、高一年级、演示实验

第四周、豆腐，电热干燥箱，粽叶，保鲜膜，平盘，盐，广口玻璃瓶，黄酒米酒和各种香辛料，高压锅，泡菜坛，各种蔬菜1、腐乳的制作2、泡菜的制作、选修1、高二年级、学生实验

第八周、高压蒸汽灭菌锅，无菌室，接种仪器，ms培养基原料，培养皿，酒精灯微生物的实验室培养、选修1、高二年级、学生实验

第十周、无菌室，超净工作台，接种箱，酒精灯，高压锅，枪状镊，组培用具。菊花的组织培养胡萝卜的组织培养、选修1、高二年级、学生实验

第十一周、榨汁机，漏斗，滤纸，恒温箱，苹果，果胶酶，不同种类的加酶洗衣粉，面布，植物油，烧杯，玻璃棒，小型洗衣机1、果胶酶在果汁生产中的作用2、探讨加酶洗衣粉的洗涤效果、选修1、学生实验

第十二周、烧杯，玻璃棒，漏斗，纱布，离心机，镊子，鸡血，柠檬酸钠，二苯胺，蒸馏水，nacl溶液dna的粗提取和鉴定、选修1、学生实验

第十三周、烘箱，圆底烧瓶，蒸馏装置，压榨机，吹风机，萃取回流装置，大烧杯，石油醚，新鲜胡萝卜，胡萝卜素的提取、选修1、学生实验

第十四周、洋葱，培养皿，滤纸，纱布，烧杯，镊子，剪刀，显微镜，载玻片，盖玻片，冰箱，卡诺氏液，改良苯酚品红溶液，15﹪盐酸，95﹪酒精，低温诱导植物染色，体数目的变化、必修2、高一年级、学生实验

关于微生物设计实验心得体会如何写二

1微生物室接种、培养、鉴定等有传染性风险操作必须在无菌室内进行，非本室工作人员严禁入内。

2 微生物室工作人员，在所有的细菌培养处理过程中都应戴乳胶手套，穿隔离衣，戴口罩，采取正确的自我保护措施。

3 拒收不符合要求的培养基、培养管等。

4必须在生物安全柜内进行细菌暴露性操作，严防操作产生可能含有高浓度的致病菌或真菌的气溶胶。

5严格执行微生物实验室技术操作规范、操作规程，自觉参加有关知识培训，及时更新知识。 6防止接触用于培养的塞子和胶带等可能含有高浓度的致病菌的一切物体。

7及时处理在培养过程中产生的污染物，严防病原微生物的扩散，微生物实验室的废弃物必须高压灭菌。

8发现可疑高致病性病原微生物时，必须立即向室负责人报告。

9发生实验室生物安全事故时立即按生物安全事故处理预案执行。

关于微生物设计实验心得体会如何写三

一、教学内容

本学期要完成七年级上册的全部内容。包括：

第一单元：认识生物(奇妙的声明现象、严整的生命结构、生物的生活环境)

第二单元：丰富多彩的生物世界(生物圈中的绿色植物、生物圈中的动物、生物圈中的微生物、生物的分类)

二、学生情况分析

本学期我担任初一5、6、7、8四个班的生物学教学任务。初一的孩子抽象思维能力还比较弱，加之生物学又是一门新的课程，因此，教学中注意想办法激发学生对生物学的兴趣，调动学生学习的积极性，同时对学生严格要求，培养良好的学习态度和学习习惯。

三、教学理念

1、立足生物学基础知识、基本技能和思维方法，突出“理解人与自然和谐发展的意义”。

2、着眼于学生未来发展，培养学生的多种能力，突出创新能力培养。

3、强调科学性与人文性有机统一，客观讲述生物技术对人类生活、生产和社会可能产生的正负两方面影响。

4、注重理论联系实际，从生活实际引入科学，再回到现实生活，始终渗透sts精神。

5、落实《纲要》提出的具体课改目标，尊重学生的主体性，促进每一名学生的发展。

6、遵循教育规律，注重情感体验，培养学生积极主动的学习态度。

7、发挥学科优势，以科学的生理知识为基础，促进学生良好心理素质的养成。

四、教学工作策略措施

1、根据新课程标准的基本要求，认真研究教材和新课程的相关知识，将新课程理念融会于日常教学活动中，在传授知识的同时使同学们能在轻松愉悦的环境中学习知识、培养能力和锻炼自己。

2、研究每个知识点，根据课程标准所规定的教学层次，严格控制深度和广度，掌握每个重点和难点，采用现代化的教学手段和教学模式，提高学生对知识的理解速度和能力。

3、加强备课的环节和内容设计，既要启发和引导学生对知识实现自主学习，体现学生学习的自觉主动性，又要发挥教师的指导作用，在教学过程中体现师生互动的教学新境界。

4、积极参加学校和各级组织的学习进修机会，从各个方面充实自己，使自己的知识水平在已有的基础上更上一层楼，同时也可以增长见识，在以后的教学活动中能够取他人之长补自己之短，使自己的教学水平能有较大的进步，对学生水平的提高也有很大的影响。

5、积极向其他优秀教师请教，既包括知识方面也包含教学方法和技巧，更重要的是学习他们的先进的教学经验，并加以优化利用从本质上提高教学水平，使教学成绩有较大的提高。

6、充分利用我校现有的实验和现代化教学仪器和教学设施，使同学们体会到科学的不断发展给我们带来的便利，促进他们学习科学文化知识的信息和毅力。

7、汇总所学知识，使知识系统化、全面化和规范化，对学生进行理论联系实际的教育，进行生物与生活相关知识的联系练习，提高学生的综合应用能力。

关于微生物设计实验心得体会如何写四

本学期生物实验室将坚持以发展为主题，以教学为中心，以提高教学质量为重点，紧紧围绕学校的整体工作，开拓进取，不断推进实验室工作向前发展。现制定工作计划如下：

1. 严格遵守实验室的各项规章制度，做到按章办事。

2. 对仪器设备进一步清点，维护，对损坏仪器进行及时维修。

3. 做好迎评材料的准备工作，增补完善迎评材料。

4. 做好新仪器药品的订购工作，并对新购的仪器及时编号登帐。

5. 认真钻研教材，大纲，开齐教材所规定的所有分组实验和演示实验。

6. 附实验开出计划

7. 第二周：高一使用高倍显微镜观察几种细胞

8. 第三周;高一检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质。高二生物体维持ph稳定的机制

9. 第六周：观察dna和rna在细胞中的分布。高三实验考查

10. 第七周;体验制备细胞膜的方法

11. 第九周;用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体

12. 第十一周：高一植物细胞的吸水和失水。高二探索生长类似物促进插枝条生根的最适浓度。

13. 第十三周:高一比较过氧化氢在不同条件下的分解影响没的活性的条件。高二培养液中酵母菌种群数量的变化。

14. 第十五周高一探究酵母细胞的呼吸方式。高二土壤中小动物类群丰富度的研究。

15. 第十七周:高一绿叶中色素的提取和分离，环境对光合作用的影响。

16. 第十九周高一细胞大小与物质运输的关系，观察根尖分生组织细胞有丝的分裂。高二土壤微生物的分解作用。

教学计划相关文章：

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关于微生物设计实验心得体会如何写五

生物技术专业是一个资料广泛、综合交叉各个学科而成的一项学科。新时期大学中生物技术专业对于我们的日常生活和工作中的重要意义可谓是不言而喻、有目共睹。生物技术将生物产品进行深入剖析和研究，从生物体不一样层次上发挥生物产品的功能，极大地提高了生物产品的内在价值，为人类的物质生活提高了更加高质量的产品。例如，我们生活中的保健食品、生物抗癌药品、转基因产品等为我们的日常生活带来了很多帮忙和方便，提高了生活质量。对于大学的生物技术专业来说，它涉及的范围很广，需要我们掌握的知识也有很多。生物技术专业不仅仅有效包括了细胞生物学、普通生物学、基因工程、生态学、分子生物学、微生物学等多种方面，这些方面与我们的生活可谓是息息相关，需要我们进行进一步的分析探讨。生物技术专业的研究现状具体如下。

在当今年代，生物技术专业热潮席卷全球，它的内在价值被广泛认知，已成为21世纪自然科学的前沿学科。在近几十年，世界格局发生了重大的变化，生命科学异军突起迅速发展。在基因工程、细胞等一系列探索成为我们学校发展的主要线索和主要方向的时候，需要更多的生物技术专业人员投入到科研项目当中。生物技术所创造的价值已经远远超过人们的想象，每一个新的发现和技术革新，都将带动大规模的产业变革，所以，社会急需很多的优质高层次生物技术人才，以持续推动社会生产力的不断提高和发展。同时，生物技术专业发展也面临着许多新的挑战。然而，目前生物技术专业高层次、综合型科研人才仍然稀少，许多科研成果距离生产实践还有很长的距离，这也就需要生物技术专业培养更多的应用型人才。总之，生物技术的飞速发展为生物技术专业的发展带来了巨大的生机。所以，大学的生物专业人才具有极为广阔的发展前景和应用价值。

虽然，生物技术专业前景极为广阔，给我们日常生活带来许多好处，然而，许多高校对生物专业的深入研究仍然不够透彻、明晰，仍然有许多问题有待于我们去解决。在生物技术课程设计中仍存在不足，许多课程和教材没有进行知识更新，无法跟上时代快速发展的步伐。课程的整体框架仍停留在20年以前的状态，创新性课程少，实用性课程也少。实验课程虽然基本满足学生的需要，但留给学生独立运作的机会还很少，束缚了学生的创新意识和思想等。同时，学生普遍的感觉是专业知识陈旧，资料缺乏与时代相对应的新颖性和先进性。并且，生物技术所涉及的具体资料、应用以及生活实际的一些具体方案与我们的期望值和预期值仍然有着较大的差距，需要我们进行进一步的分析、研究、讨论。

既然大学生物技术专业与我们的生活息息相关，现根据我个人的一些观点，对生物技术专业的发展趋势进行简单的解析。

1.生物技术专业的市场导向。生物技术专业的重要现实意义是不容否认的，这就决定了生物技术在现代社会的发展趋势。从基础科学方面，它能够有效地帮忙人们清晰的感受到自然生命和生物的存在，加深人们的理解。在人们的日常生活中，生物技术能有效地帮忙人们治疗一些疾病，方便人们的生活，例如器官移植等先进的技术的有效推广给人们生活带来了不可思议的惊人的好处，这就是生物技术的魅力所在。再如，人们研究的抗倒伏、抗旱等新的'品种，不仅仅有效提高了人们的生活质量，更有效地减轻了人们的负担。毕竟，生物技术存在并能够得到广泛推广的根本原因在于它能够为人类造福。生物技术与工程学科专业的区别在于不仅仅应用于工厂生产，并且在于生物本身的潜力开放，从基础的营养价值到功能性活性成分分析，再到食用或药用价值开发，日新月异的新技术不断涌现，为生物技术专业发展带来了新的机遇和挑战。这就需要不断学习和认识现代生物技术发展的动向和潮流，加快脚步跟上甚至超越前沿，才能获取主动，从而构成主动性市场导向而不是被动顺从。综上所述，大学高校中的生物技术专业的发展方向是经过进一步的科学研究，给人们的生活水平带来质的飞跃，这也是高校生物学专业设置教学目标和教学资料的重要方向。

2.生物技术专业的就业方向。随着生物技术的逐步普及，人们的生活也越来越离不开生物技术专业方面的人才，所以，这就为生物技术专业的高校学生供给了优越的就业机会和发展前景。随着社会生产力的不断发展提高，对生物技术行业的需求，国家从宏观层面上更加重视高等学校生物技术的专业水平，要求不断提高，对专业教学自然要有更高的要求，将有更多的高校开设此专业，对专业教育工作者的需求自然会增加。从事专业教学工作，不仅仅需要扎实的专业知识、技能，也要有本事应付这个瞬息万变的社会。同时在就业方向上，大城市与小城市、经济发展迅速地方和经济发展缓慢的地方相比，有着巨大的区别，对于生物技术专业人才来说，地区性差异造成的发展空间差异是必然的。先进性技术的发展是以经济实力和实际需求程度为基础。据统计数据显示，此刻就业的生物技术的毕业生，超过80%的人选择到北京、上海和各大省会城市工作，认为留在大城市对本专业及个人以后的发展都能供给更多的机会。生物技术专业学生的就业目前主要在自主择业、公务员和考取硕士研究生等三个方向，这也是学生本人的意愿。有的学生已经厌倦了大学生活，急于进入社会工作，以期锻炼自我，实现自我价值；有的学生采取稳妥的方式，考取公务员、村官或教师等途经，实现就业。但不管从哪个方向迈出就业这一步，都需要付出艰辛的劳动和努力，这也是所有生物技术专业学生所面临的问题，由于缺乏社会经验，导致就业后跳槽频繁，甚至灰心丧气。所以，应对这样的生存挑战，仅有从主观上加深学生的专业技术技能和人际社会经验，从客观上耐心寻机，才会寻求到新的发展机会。

生物技术专业具有良好的发展前景，它与信息科学等专业同样具有发展迅猛、日新月异的特性。对于生物技术专业的大学生，机遇与挑战并存，生物技术专业着重培养具备丰富实践经验、掌握扎实的基本知识、遇事有分析问题、解决问题的本事的综合素质的人才，谁能够真正掌握先进的科学知识和科研技能，谁就将领导生物技术的导向。正所谓，术业有专攻，人们对于生物技术专业的人才要求是十分严格的，这就需要学生在大学期间积累很多的知识和经验，经过量的积累，从而到达质的飞跃。在就业中的方向选择将一向是生物技术专业人才需要研究的根本性问题，这也就需要学生在进入大学之初，就能够规划好自我未来发展之路，这样才能成为最终的成功者。所以，这就需要学生具有全力以赴的精神和毅力，为生物学更好的造福人类做出自我的贡献。

关于微生物设计实验心得体会如何写六

本期继续任教高三8、11两个班的生物。上期期末重庆市统考中，两班学生卷面成绩较期中有了较大幅度的提高。总的来看，学生在复习过程中知识得到升华，能力得到提高。通过第一轮复习，在基础知识的掌握上，大部分学生能达到相应的教学要求，对于考查生物学的基本概念、原理、实验方面与试题，得分率较高，但也暴露出一轮复习中存在的一些问题：

(1)部分学生将前一轮复习看作高二上课的重复工作，只满足于对一些基本知识演义的掌握上，不注重知识点之间的因果关系、运用条件和范围，以及相关知识点的联系和区别，一轮复习下来，各知识点仍是孤立的、零散的。

(2)不重视课本，学生在复习中关注的重点是复习资料，大部分时间忙于做题，对答案、提问上，对于一些基本概念、原理的理解仍停留在原先的水平上。如对什么叫性状分离、显性基因、杂合子仍是想当然，在解决考查概念的题型时，错误率较高。

(3)解题能力弱：在复习过程中，学生进行大量习题训练，做的题多，但对失误的地方不够重视，缺乏仔细分析过程，只关注答案，出现一错再错的现象，同时也暴露审题不严，答题不规范的问题。

1.教学内容：

本期主要进行高考专题复习及考前研练。专题复习的内容分为：1.生态环境。2.人与生物圈;

3.代谢、微生物与发酵工程;4.生物实验技术与方法;5.生物学前沿与发展。专题研练，通过分析高考命题特点和解题技巧，结合考前仿真研练提高能力。

1 重视知识的结构网络

根据信息加工理论，人类的记忆是一个信息加工系统。刺激过程是信息的输入，中枢过程是信息编码、存储，效应过程是信息的提取。处于无序状态下的知识，使大脑产生充塞感，思路难以开阔，易出现“翻开书本什么都懂，合上书又感觉什么都不会”的无为状态。教学中突出知识结构，不但可以使学生学到系统化的知识，较好地建立起各知识间的联系，更有利于对知识的理解、记忆和在应用时迅速提取。

2 重视知识的科学探究

科学探究活动通常是指学生们用以获取知识、领悟科学的思想观念、领悟科学家们研究自然界所用的方法而进行的各种活动。近几十年来，许多科学教育家都认为科学探究是学生学习科学的有效方式之一。科学探究重要的是在于它的过程而不完全是结果。通过科学探究激发学生学习兴趣，形成科学的思维方法，掌握了这种技能可以使人终身受用。

3 重视实验的分析设计

实验能力是一种综合能力。目前高考，虽然还不具备考查考生的实验操作能力。但非常重视实验内容的考查，如实验原理、实验程序、实验现象和实验结论等内容的分析。通过以往高考题的调查统计显示，学生对实验的理解能力、实验结果的分析和实验过程的设计能力有一定的差距。所以，教学中要重视实验的分析和设计。在复习中，要重视分析实验程序，认真分析实验中每一步骤的作用，每一处理的意义，以及各步骤之间的相互联系;既要知道怎么做，为什么这样做，还要想想换一种做法行不行，为什么?从中学会解决问题、研究问题的方法及寻求最佳方法的途径;要重视分析实验结果，既要重视对实验最终结果的记录，又要重视要求学生对实验的中间过程出现的现象进行记录，并重视对结果的分析以及对成功实验的分析，实验失败原因的查找;要重视设计实验程序，从 1教材中的经典实验入手，学习前人实验设计的好方法、好思路，不断进行实验设计练习，不断加强这方面的针对性训练，帮助学生理解并掌握实验设计的一般方法和规律，提高学生的实验能力，培养学生的创新精神和创新能力。

4 要重视解题的失误诊断

在平时的具体解题过程中，应认真分析“题示信息”，利用扎实的“基础知识”，进行缜密的“科学思维”，保持良好的“心态环境”，这些做好了，就会不出错或少出错。有的学生在解题中会出现各式各样的失误，如：知识记忆性失误;题示判断性失误;思维准确性失误等等。要认真分析学生失误的原因，因材施教，提高学生解决问题的能力。

在教学过程中要注意：

1.讲：知识网络、内在联系，改题思路，要防止借口基础差满堂灌。(课前要反思教案，如何上得更好)

2.练：试题要精编，要讲梯度，要微型试卷进课堂。一般不要用套题，剪刀加浆糊，制成微型卷(5-6个选择题，2-3个非选题)一堂课解决问题(考30-35分钟，评10分钟左右)。

3.评：做到正谬误，理思路，寻规律，求规范(学生尽可能地用生物学术语、观点答题)。

4.读：学生带着教师提出的跨度较大、知识迁移要求较高的问题，跳跃性地读结论性的语言、理解到位，在教师指导下回归教材，通过读，知道试题的来龙去脉。

5.思：在课堂教学中，要让学生有足够的时间对知识进行反刍和对试题进行反思，要诱发、唤起学生思考，教师还要一讲到底，象打机关枪。

6.辅：一个是阅视时个别解答和检查，二是练习的集中批改和面批面改，尤其是培优和转差的对象要耐心辅导。

关于微生物设计实验心得体会如何写七

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：xxx学号：2011001400xx年级：20xx级生物基地班 实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组 同组者：xx

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。