生物标本社心得体会报告 制作生物标本实践报告(8篇)

在平日里，心中难免会有一些新的想法，往往会写一篇心得体会，从而不断地丰富我们的思想。我们如何才能写得一篇优质的心得体会呢？下面是小编帮大家整理的优秀心得体会范文，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。

主题生物标本社心得体会报告一

课堂教学的基本原则：大课堂、大容量、低难度、主动参与、三讲三不讲(讲重点;讲难点;讲易错点，易混点，易漏点;学生会的不讲、“先学”已经掌握了的不讲、内容太偏或者对学生的知识结构和今后发展没有太大的作用不讲，给学生的支配的时间多了，就给了学生主动性。)、真正使生物课成为高效课堂;

课堂教学的模式：预习检测——情景引入——目标展示——学案导读——自主学习——思考体验——合作探究——迁移应用及反馈;

二、强化基础知识教学

高一学生所学生物知识应以基础知识、基本技能的掌握程度为教学目标，适当提高学生生物知识的分析、解决实际问题的能力。因此，在教学过程要使学生做到深入理解所学知识，清晰地熟悉某个知识与其他知识之间的区别和联系;并知道使用这些知识的条件和步骤，引导学生学会组织相关的知识解决实际问题。

三.加强学法指导，培养学生良好的学习习惯和学习兴趣

教师在教学过程中要加强对学生的学法指导，以提高学生的学习效率。要使学生懂得如何才能学好生物，要引导学生掌握生命科学的本质规律，促使学生形成适合自身发展的学习习惯。生物教师要发挥学科优势，培养学生的学习兴趣，要结合生产、生活实际进行教学和开展各项活动，培养学生运用所学知识解决实际问题的能力，让生物课堂教学充满激情和活力。

四.加强对《新课程标准》和学业水平考试试题分析研究

要结合教材对《新课程标准》作深入细致的探讨，深刻把握新课程标准的各项要求和教材的知识体系，在此基础上及早制定出措施具体、切实可行的教学计划，学业水平考试命题是依照《新课程标准》中的内容和要求;因此我们一定要杜绝轻视《新课程标准》，或仅仅了解其中的知识要求，及时分析掌握学业水平考试试题体现着的要求和动向，我们高一教师要从长远着手，及早加强对学业水平试题的分析研究，从中找出小高考命题的方向和规律。

主题生物标本社心得体会报告二

一、人员组成及其基本情况

整个高三生物备课组由廖少卯、梁媛和吴玉芳三人组成，为我校高三生物备课组人数最多的一次，以前都是两人，有两届以上高三教学经验的两人，一人第一次上高三;两人有跨年级教学任务。

二、学生基本情况

整个年级七个理科班，114班和115班是普通班，116班和117班是次重班，118班和119班是重点班，1110班是补习班(学生成绩与116、117相当)，学习能力最强的是118和119班，最差的是114和115班，另外三个班处于中等水平。

三、群策群力制定好复习计划

我们20__届高三生物备课组比往届多了一个人，俗话说得好，多一个人多一份力量，多一个人多一份智慧，大家群策群力，共同制定高考复习计划。因为整个高三学生成绩参差不齐，所以我们根据不同班级情况，复习进度有快有慢，补习班(1110班)最先进入一轮复习;应届两个尖子班(118和119)一轮进度也较快，九月份进入一轮，二轮进度基本和补习班一样，两个普通班(114、和115)学生基础比较差进度最慢，116和117处于中间。但总体上都还是按照学校的高考备考方案的复习进度进行。一轮复习在二月下旬结束，比计划提前10天左右;二轮从三月上旬到四月下旬，五月上旬以后主要是强化训练(高开题强化训练)。我们这一届对高考题的使用时间比较长，试题量也比较多，而且都想成ppt格式，在讲评时都尽可能的利用多媒体来展示、讲解。

四、提前选好复习资料

结合前几届的经验，我们这一届使用的资料，一轮是《三维设计》，二轮用《3年高考2年模拟》。一轮资料是8月份就到学校了，二轮资料在第一个学期末也到了学校。

五、关爱学生

我们组的老师跟其他组的老师在教学上理念和教学技术上可能没有什么很特别的地方，我们组最大的优点就是老师比较年轻，跟学生很容易相处，而且我们组的老师都特别的有耐心和爱心，都能很热诚的关怀学生，学生也很乐意跟我们老师交流、交谈。

六、及时给学生反馈各种高考信息

我们全组老师都随时关注各种高考信息，积极参加各种有关的高考培训会，特别是5月_日我们全组三人都参加了“柳州市20__年高考生物学考前指导交流会”。会后大家都感觉很有收获，别且对学生的后期复习指导很有帮助。高考结束后，很多学生对我们说，今年高考生物很容易。当听到这些话时我们都感觉高考前的那次柳州市培训真的很有用，没有白参加。

主题生物标本社心得体会报告三

在新的学期里本人将继续担任七年级生物教学工作，为了出色的完成本学期的工作，特将本学期的教学工作计划如下：

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初一学生对周围的一切事物都很新鲜好奇，作为教师应唤起他们的热忱，让学生对知识产生兴趣，产生学习动力，以到达提高学生成绩的目的。

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面向全体学生、注重学生的全面发展和终身发展；提高学生的生物科学素养；倡导探究性学习，在全面贯彻国家教育方针的基础上，根据学生身心发展特点和教育规律，重视对学生进行全面的科学素养教育，体现国家对学生在生物科学知识和技能、潜力以及情感态度与价值观等方面的基本要求，着眼于培养学生终身学习的愿望和潜力，体现义务教育阶段生物课程的普及性、基础性和发展性。

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知识方面获得有关人体结构、功能以及卫生保健的知识，促进生理和心理的健康发展。潜力方面初步学会生物探究的一般方法，发展合作潜力、实践潜力和创新潜力；情感态度和价值观方面了解我国的生物资源状况和生物科学技术发展状况，培养爱祖国、爱家乡的情感，热爱大自然、珍爱生命，逐步养成良好的生活习惯和卫生习惯，确立用心、健康的生活态度。明白人类起源和发展与人类个体发生和发育的大致过程；了解人体的各种生命活动的大致过程及相关的结构基础；了解人的各种生命活动都直接或间接地与生物圈或生活环境密切关联着，而人类的活动对生物圈又有着十分重要的影响。

透过观察与思考、探究、实验和资料分析等活动，加深体验科学探究的一般过程，进一步提高提出问题、出假设、制定并实施探究计划、记录和分析探究结果等技能和发展科学探究的潜力。

认同科学研究是一个不断发展的过程，人们在研究的过程中，不断有新的发现和新的观点出现。启迪学生进一步养成勤于思考、乐于探索、勇于实践的学习习惯；进一步构成保护生物圈的意识和人与自然和谐发展的观念，并规范自己的行为，用心参与环境保护的活动。

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教材的编写注重从生活实践出发，避免了从理论到理论；注重创设问题情景，引导学生探究；给学生更多的自主学习空间，学生生活情景图片化；进一步加强了可读性。

七年级的学生上课注意力不集中，课堂应增加趣味性。学生比较喜欢动手在教学中应增加学生实践资料。让学生初步具有良好的生物学习思维。新的学期给我们的教学工作带来了更多的期望，在开始将工作一步一步努力做好，用饱满的精神状态为工作注入新的活力。

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教师透过上一学期的教学工作已对学生的学习特点有了必须的认识。在教学过程中需要为探究性学习创设情景；鼓励学生自己观察、思考、提问；注意课内外活动相结合，加强对学生基本实验技能的培养。在对学生的评价方面主要包括：对学生的探究潜力的评价、对学生情感态度与价值观的发展状况的评价。

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注重学生的＇实验与探究的设计和操作，从而锻炼学生的动手潜力、思维潜力、合作潜力。充分利用网络资源，发挥现代教学手段的功能和作用，与学生一齐，共同探究，共同学习，共同进步。

主题生物标本社心得体会报告四

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本学期我担任高一生物学科教学工作，从考试情况来看，成绩不算理想。认真回顾这半年的教学工作，做如下总结。

在教学中，我长期细心观察无心向学、成绩始终不能有较大进步的学生，我发现他们没有真正意识到学习是一个努力、尝试、体会的过程。优越感使他们养成怕麻烦--急于求成，想一步到位得出答案，基于此，在教学中我试着运用了赏识教育法，有效的克服了这一问题。学生的意志、毅力也得到很好的培养、提高。只要在教学中注重对学生心理训练，养成健康心理----讲究方法，敢于挑战，定能使学生学有所成。

总之，整个教学环节让学生在主体积极参与、操作、交流、动脑、动口的探究性学习中建立概念、理解概念和应用概念。实践证明：学生学习方式的转变，能激发学生的学习兴趣，让课堂焕发师生生命的活力，让课堂更精彩。

针对情况，我准备采取如下措施：

第一。转变学生学习态度。针对一部分基础较差的学生，我要拉近与他们的关系，走进他们的心理，找出根源，转变学生对学习的错误认识，消除学习中的消极情绪。给予他们学习方法的指导。

第二。加强课堂管理，提高课堂效率。要改革自己的教学方法，激发学生的学习兴趣，使之愿意学，乐意学，积极主动地学。在每节课上，每次作业都要培养学生的审题意识与能力。在夯实基础知识的同时，培养学生运用所学知识综合能力以及工整的书写。培养学生细致审题的能力，防止马虎出错。

第三。努力提高自己。平时多看一些有关教学方面的资料，特别是与自己所教年级有关的。多听课，多向有经验的老师学习。

第四。认真备课，精选试题保证学生学足，学精。

第五。虚心向其他老师请教，进一步提高教学成绩，加强学生能力的培养，实现优生成绩的提高。

第六。加强课堂教学的灵活性，用书要源于教材又不拘于教材;要服务于学生又要不拘一格;加强课堂教学中的寻求规律的教学。这样，不仅使学生学到知识，而且还培养了学生探究规律的科学精神和创新精神。

主题生物标本社心得体会报告五

一、学情分析：

通过上一个学期的学习，大部分同学们已学到了一些生物学基础知识，动手能力有所提高，特别是显微镜的使用，临时装片的制作。本期仍要想方设法激发学生学习生物学的兴趣，将竭尽所能开设实验课、开展调查活动，进一步提高学生的观察能力、发散思维能力、动手操作能力、分析问题的能力及表达能力。使同学们无论是在知识还是在能力上都迈上一个新台阶。

二、教育教学目标：

1、知识目标：

让学生知道人类起源和发展;知道人类个体发生和发育的大致过程;了解人体各种生命活动的大致过程及相关的结构基础;了解人的各种生命活动都直接或间接地与生物圈或生活环境密切关联着，而人类的活动对生物圈又有着十分重要的影响。

2、能力目标：

通过观察与思考、探究、实验和资料分析等活动，加深体验科学探究的一般过程，进一步引导学生自己提出问题，作出假设，制定并实施探究计划，记录和分析探究结果。促进学生进一步发展科学探究的能力。培养学生通过测量获取数据，设计表格记录和整理分析数据的技能。培养学生收集和处理信息的能力。提高学生的分析能力、阅读理解能力、主动学习能力、合作交流能力及语言表达能力。结合科学发现史、科学家的故事和具体探究过程，引导学生进一步领悟科学探究的一般过程和方法。如是否需要作出假设、如何作出假设、设置重复实验以减小误差、用工具测量的必要性、五点取样法、数学推算法等。

3、情感、态度、价值观目标：

认同科学实验的重大意义;认同科学研究是一个不断发展的过程，人们在研究的过程中，随着研究手段和研究方法的不断改善，对某一问题的认识，不断有新的发展和新的观点出现;认同科学是实事求是的;使学生进一步养成善于观察、勤于思考、乐于探索、勇于实践的优秀品质;形成保护生物圈的意识，形成人与自然和谐发展的.观念，并规范自己的行为，积极参加环境保护活动;理解科学、技术与社会的相互关系，提高生物科学素养，促进学生在情感态度价值观方面的健康发展。

三、教学内容及教材分析

本期的教学任务主要在七年级《生物学》下册。下面对教材内容作基本分析：

《生物学》下册仅一个单元——生物圈中的人。本单元的七章可以分为三个部分。第一部分是第一章人的由来。教材通过观察与思考、资料分析、技能训练和探究活动，引导学生了解人类的起源和发展，人的个体发生和发育，青春期的发育特点和卫生习惯的养成以及认同优生和优育。第二部分包括第二、三、四、五、六章，这部分的教学通过多种探

究活动，引导学生了解人的食物来源于环境，人体生命活动的能量供应，人体内物质的运输，人体内废物的排出，以及人体通过神经系统和内分泌系统调节生命活动。第三部分是第七章人类活动对生物圈的影响。本章重点是通过实例分析、模拟探究和拟定计划等活动，引导学生进一步认识人类与环境的密切关系。

本单元并不是单纯地讲人体生物学，而是在讲述人体的由来、人体结构和生理内容的同时，始终将有关人体的内容放在生物圈或生活环境的背景中，引导学生分析和理解人体生理或人类活动与环境的相互关系。本单元突出了人与生物圈的关系，是以“生物圈中的人”为主题展开的人类生物学、人体生理学、环境生物学等科学的综合。

主题生物标本社心得体会报告六

现阶段,本班现有的学生相互之间学习及纪律情况参差不齐，会自然而然地产生一系列的问题，需要提高优生的自主和自觉学习的能力，使其影响并提高中等生的学习成绩，帮助差生取得适当进步，让差生在教师的辅导和优生的帮助下，逐步提高学习成绩，并培养较好的学习生活习惯，并逐步提高纪律意识和思想道德水平，形成良好的自身素质。

在课堂教学中的,就必须抓基础知识，抓基本技能，以重要生物知识为主进行教学，使学生能逐步形成系统的生物思想与方法，为学生打下扎实的生物基础。在课堂教学中,全面提高学生学习的主动性和积极性,使学生转变观念、认真学习、发展智力、陶冶品德，使学生活起来。在学生中形成“赶、帮、超”浓厚的学习氛围，使每个学生都能健康地成长。激发学生的学习兴趣，全面提高教育教学质量，力求每一个学生学习不断进步，能力不断提高。

从学习情况、知识技能掌握情况以及日常行为规范情况来看，大部分同学学习积极性高，学习目的明确，上课认真，动手能力强，各科作业能按时按量完成，且质量较好，自我要求严格，特别是班干部能起到较好的模范作用。但同时，仍然有部分学生学习不够认真，纪律生活方面比较懒散，自我控制力不强，出现上课讲小话、睡觉、不做作业等现象。根据实际情况，培优工作要有全局观念，抓好生物培优辅差工作，实行分层教学，生物基础差的学生要从最基本的知识点补起，鼓起他们对学习生物的信心，采取循序渐进，由浅入深的启发式教学，变要他学为他要学，使他们能主动发现问题、提出问题。对于生物基础较好的学生，鼓励他们力争高分，有针对性的选取一些思考题，让他们去分析和解决，使得他们“吃得饱”，提高他们的分析、解答问题的能力。甚至要从严要求，规范他们解答生物问题的步骤。在平时的教学中要以中间层次的学生为主，兼顾两头。这样下去生物的整体成绩才能有提高。

具体措施：

1、实行教师辅导，学生帮辅的双重辅导模式。

2、以平时的作业为基础，加强学习方法的辅导。

3、及时召开学生会议，总结成绩，分析不足，提出要求。

4、结合考试，搞好培辅工作的查漏补缺。

5、利用适当时间对学生进行思想道德教育，文明教育，纪律教育。

6、实行以点带面来全面提高，使学生观念进行转变。

7、让优生讲述自己的学习方法，进行经验交流。

8、充分发挥优生的表率作用来影响差生，改变差生，在学生中形成“赶、帮、超”的浓厚学习氛围。

9、差生进行多鼓励、少批评、多谈心，进行心理沟通，提高他们的自我判断与控制能力。

10、激励机制，多给点差生表现的机会，让他们树立起学习的信心和勇气，克服自卑的心理。必要时与家长联系，共同来解决差生各方面存在的问题。

主题生物标本社心得体会报告七

本学期我适应新时期的教学工作，认真学习教学工作。从各方面严格要求自己，积极向老教师请教，结合本校的实际条件和学习实际情况。使教学工作有计划，有组织，有步骤的开展立足，放眼未来，为使今后的工作取得更大的进步。

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内容及学生的实际，设计课的类型。认真写好教案，每一课都做到有备而来，每堂课都在课前做好充分的准备，并制作各种有利于吸引学生注意力的教具，课后及时对该课作出总结。

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在教学中，要使内容讲解更清晰化、条理化、准确化、情感化、生动化，层次要分明，深入浅出。在课堂上特别注意调动学生的积极性，加强师生交流。让学生学得容易，学得轻松。在课堂上尽量让学生多动口动手动脑。以及也要充分考虑每一个层次的学生学习能力。

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在教学上有疑必问，多听其他老师的教学方法，学习别人的优点，克服自己的不足。

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布置作业做到精读精炼，要具有针对性，同时也要及时批改，认真分析学生作业的情况，他们在作业上出现的问题要及时讲解。在课后，要求学生认真复习课后练习，课前准备。

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在我所教的班级中，我上课要求比较严格，要求大部分学生必须专心听课，课后认真完成作业，但有少部分学生学习上存在的问题是不敢问，所以作业都是抄袭来完成任务。这样只会严重影响成绩的提高。对此，我要求学生在学校上要有一种提高的精神，遇到的问题要及时问，对抄袭作业的学生严厉的批评。这样才能提高自己的成绩。

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在教学中，大部分学生上课认真，学习积极，在考试中取得了好的成绩，少部分成绩偏差。也许是因为上课不认真听讲，不做作业，不思考问题的原因。只要认真听讲的、积极做作业的学生都考的比较理想。这也与本人有关，在教学上要认真做好课后辅导工作，严格要求学生听讲，使学生学有所得。这样才能不断被提高自己的教学水平和教学任务。

通过这一学期的努力，充分的调动学生的学习积极性和自主创新能力，提高了学生学习生物的兴趣，学生掌握了学习生物的方法，自学再生能力得到了进一步的发展。

主题生物标本社心得体会报告八

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：xxx学号：2011001400xx年级：20xx级生物基地班 实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组 同组者：xx

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1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

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1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

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1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

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1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

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（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。