微生物限度检查的心得体会和方法 微生物限度检测方法(7篇)

学习中的快乐，产生于对学习内容的兴趣和深入。世上所有的人都是喜欢学习的，只是学习的方法和内容不同而已。好的心得体会对于我们的帮助很大，所以我们要好好写一篇心得体会以下我给大家整理了一些优质的心得体会范文，希望对大家能够有所帮助。

推荐微生物限度检查的心得体会和方法一

高考最鲜明的特点是基础性。基础知识是高考的第一依据，高考命题所涉及的知识多是被理性抽象化了的知识在考题中借一定的情景出现，要求考生用生物学概念、原理、规律等做出说明，基础不扎实是考生失分的第一原因。所以在学习中要做到能清楚地复述基本概念、基本原理和基本观点;能对重点的概念、原理和观点进行分解和综合;能梳理教材的知识体系，揭示重点知识之间的内在联系;能比较、分析同类型知识的差异之处;能运用所学知识分析、解决实际问题。

从20xx年的试题可以看出，高考对基础知识的考查并没有弱化，而是要求更高了，高考不再是考查知识的再现，而是考查能否灵活运用所学知识分析和解决具有综合性质的实际问题。这就要求学生在学法上要以课本为本，充分发挥课本的主导作用，弄清每个章节的知识点和要求，基本规律的来龙去脉以及本章节内容和前章节内容的关联。不仅要加深对基本概念、基本规律的理解与运用，而且还要弄清概念、规律的形成过程。完整地复习基础知识，使用一些学习策略，如画概念图、框架图等构建生物学科的知识体系，不能留存知识盲点。

2.复习突出重点，加强考点的前后联系

主干知识内容不仅是学习的重点，也是高考试题中出现频率较高的考点内容。如细胞的结构与功能、有丝分裂、减数分裂、光合作用、呼吸作用、细胞内的物质代谢、生命活动的调节、遗传的基本定律、伴性遗传、基因突变、染色体变异、生态系统的结构与功能、环境保护、基因工程、免疫、细胞工程等等。对这些主干知识内容的理解要有一定的深度和广度，才能以此去分析和解决新情景的问题。要力求做到知识点、能力点、薄弱点、应用点和考查点心中有数，那种不分主次泛泛复习以及题海泛滥，无疑都是有害的。概括起来高中生物的主干知识有以下方面的内容：

在生命的物质基础和生物体的结构基础方面，重点考查蛋白质和核酸、细胞增殖过程中的染色体的变化规律等;特异性免疫和免疫失调引起的疾病等内容;

在生物的新陈代谢方面，重点考查酶、光合作用和呼吸作用、三大类物质的代谢及微生物的代谢特点等内容;

在生命活动的调节和免疫方面，重点考查激素调节及与生活相关的免疫知识;

在遗传和进化方面，重点考查从基因水平上分析遗传学问题以及遗传育种和遗传系谱;

在生物与环境方面，重点考查应用生态学观点方法分析问题和解决问题的能力。

3.重视实验能力的提高

生物都是以实验为基础的自然科学，它的许多知识来源于对实验结果的分析、归纳和总结。对实验能力的考查是当前高考的重要内容之一。对于每一个实验，必须认真弄懂实验目的、原理，熟悉实验器材，掌握实验方法和步骤，既要重视实验结果，更应该重视对结果的分析，学会探究和推论;能正确处理数据，对结果整理与计算，得出正确结论，能处理非预期现象。

同时还要熟悉实验设计的基本方法和技巧，从而培养自己的实验能力和创新精神，适应高考试题的变化。因此要注重挖掘教材潜在的实验与探究因素，自然科学的知识是在观察、实验的基础上得出或通过实验得到实证的，复习时要多从实验角度想一想，这一结论是怎么得出的?我们有没有办法进行验证与探究?加强实验的基本思想、方法以及实验题的解题技能、技巧的形成训练。要掌握实验与探究的基本方法以及解答实验类试题的基本技能。

4.复习的广度比深度更重要

从近几年的高考可以看出，今后的命题可能会无所谓传统的重点、热点、冷点之分，因此要善于构建知识的体系与网络，彼此融会贯通，并注意查漏补缺，由“深挖洞”教学向“广积粮”教学转轨，知识的广度应该得到充分展现，要培养学生能读懂自然科学方面资料的能力，能看懂图表所包含的信息，并能从中找出规律，具备基本的自然科学知识以及判断、推理和计算能力。阅读生物学方面的资料时，要能读懂模式图、示意图和图解。

5.知识的综合应用是关键

学习生物基础知识仅仅停留在理解上是不够的，还要能在理解的基础上，应用这些知识指导自然科学的研究、社会的生产和人类的生活。要求准确把握、理解生物学知识，形成知识的迁移能力，解决生产、生活中实际问题，重点在于：

①用自然科学的基本知识解释和说明人类生活和社会发展中遇到的问题;

②了解自然科学知识在人类生活和社会发展中的应用;③能够运用自然科学的知识对有关见解、实验方案、过程和结果进行评价。

6.突出图文信息转换与分析能力的培养

高考中以图像、图表和数据的信息出题是最为重要的考查手段。能够阅读这类资料并初步运用这种资料形式，把握事物的特征、规则或关系，体现了收集和处理信息的能力、获得新知识的能力、分析和解决实际问题的能力。生物体内的生理过程，往往随着时间、外界条件的变化而发生有规律的变化。

这些规律往往通过曲线的形式表达出来，以曲线、图表为载体，可考查学生将图表转换成文字表达，或把文字转换成图表表达，甚至图表间的转换能力。这类试题能够考查学生的识图能力、判断能力和分析表达等多种能力，而且有较好的区分度，因此将会是新教材背景下高考命题的热点和重点。因此复习中应注意从情境中获得信息。平时要加强识读图表能力的训练，善于从图、表提供数据的处理过程中获取信息，理解题意，作出正确判断。

7.科学作答不可忽视

规范化答题时考场上减少失分，获取高分的重要法宝。首先，在保证答题方向正确时，一定要认真审题，逐字逐句看清楚，提取一切有效信息，挖掘一切隐含条件，排除干扰信息和迷惑条件，从容答题。答案要准确，要做到条理清楚、逻辑严谨;简洁明了，答案要尽量使用规范化的学科语言。平时要做到错题分析订正要到位，复习中要有一个错题本，监督自己把握重点，消除盲点，加强弱点，切实做好纠错。生物试题很多，无论如何也做不完。

因此要归类做有代表性的试题，一般情况下第一次做对的题，以后不会做错，第一次做错的题，以后做错的可能性较大，因此要有一个错题本，对作业、考试中出现的差错，及时反思，及时纠正;对事故易发地带有意识地加以强化训练。每一次练习或考试后，要对差错做出详尽的分析，找出错误原因。这同时为考前的复习积累了重要的有针对性的资料。

细节决定成败。高考解题不规范是造成考生非智力因素失分的一个主要原因。尤其是实行网上阅卷后，对规范解题提出了更高的要求。比如对字体潦草的卷面直接评卷和扫描到计算机中再评卷，可视效果就不一样，后者会更差。所以解题要做到“四化”，即段落化、序号化、要点化、提示化。答案要力求具有准确性、科学性、完整性、简洁性。最后，结果一定要写在醒目的位置。

8.心态很重要

高考二轮复习时决定高考的关键，不仅是因为它是知识方法综合的关键，也是学生心理的关键期。临近高考，考生最容易出现急躁情绪。许多考生的放弃都是从第二轮复习开始的，原因主要是各科进行二轮复习的内容跨度大，综合性高，部分学生有些吃力，另外随着高考的临近，学生的心理压力比较大，所以在第二轮复习中，不仅要重视知识方法能力的培养，更要重视良好的心理素质的培养。

“学会”永无止境，“会学”更为关键。我们在二轮复习的过程中，应针对自身的实际情况，找准“分数增长点”，消化掌握已有的知识，把漏洞补齐，把薄弱的环节夯实，把该记的东西记牢，相信成绩会有很大的提高。

心存高远，保持一种平静而有激情的心态，加上矢志不渝的努力，成功就会向你绽开灿烂的笑容。

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。

推荐微生物限度检查的心得体会和方法三

第一章 总 则

1。为了加强病原微生物实验室的生物安全管理，保护实验室工作人员和公众的健康，制定本制度。

2。医院和科内实行对实验室的实验活动进行安全管理与监督。

3。实验室实行分级管理，检验科微生物室为二级生物安全标准。

4。检验科负责微生物室日常活动的管理，承担建立健全安全管理制度，检查、维护实验设施、设备，控制实验室感染的职责。

第二章 生物安全水平

生物安全水平一般可分为四级：

a。生物安全水平ⅰ级：用于已知的通常不引起健康成人感染，对实验室人员和环境危害甚少的病原体，如大肠艾希氏菌等。

b。生物安全水平ⅱ级：用于具有中度潜在危害的病原的实验操作，主要防止通过皮肤黏膜及消化道的感染，实验室应有进出规定程序，粘贴生物危险的警示标志。

c。生物安全水平ⅲ级：用于可通过气溶胶传播的，能引起严重可致死性疾病的病原体，如结核分支杆菌等。

d。生物安全水平ⅳ级：可用于可通过气溶胶传播的，能引起致死性感染的高风险剧毒病原的操作。同时还要有内部和外部进行对话的装置，要有应急供气、应急供电和应急出口等。

第三章 生物安全操作要求

实验室操作要求分为标准微生物学操作（见微生物操作规程）和特殊操作，前者是指实验室安全的共性要求，后者是指根据特定生物安全的级别提出的特殊要求。

安全装备：为达到生物安全的目的，安全装备包括两部分，即操作设备、生物安全柜。二级实验室必须有可提供一个无菌操作的生物安全柜。

个人防护用品：主要有工作服、隔离衣、防护服、工作帽罩、眼罩、面罩、手套，呼吸保护装置及正压气体供应的.工作服等。

第四章标本的采集、转运和接收

微生物标本在接收时操作者要穿工作服、带手套和口罩，必要时要戴眼罩，必须在生物安全

柜内执行严格操作。所有盛标本的容器必须是防漏的。在转运时应密封，标本不可发生泄露。一旦发生泄露，应高压灭菌处理。具有强感染性的标本转运时要严格包装，严格操作。标本的采集应由专人转送，实验室应由专人验收和签收。

第五章 生物废物的安全处理

1。生物废物包括培养物、分离物极其污染物，剩余标本极其污染物，尖锐破碎物，吸管、针头和费包装等。

2。生物废物的安全处理要求：a。装废物的容器应防漏，坚固而不宜刺穿，密封并要避免装的太满。b。尖锐的破碎物要放入专用的硬质容器中。c。盛放生物废物的容器应置入高压灭菌袋中送去灭菌。d。所有能在实验室消毒的物品在送出实验室前尽可能先进行一次消毒处理。e。盛放生物废物的容器要做到安全转运。

第六章 安全应急措施

1。操作者暴露的处理a。立即报警并告知同事。b。立即用肥皂水清洗暴露表面，用洗眼液洗眼，用生理盐水漱口。c。启动应急治疗。d。尽快向上级报告。

2。污染表面的处理a。立即报警并告知同事。b。隔离污染区。c。处理者穿戴适当的防护服。

d。用镊子将污染物移入废物桶。e。用干毛巾吸干，将消毒剂到在毛巾上，一段时间后仍入废物桶。f。先后以消毒剂和酒精清洗污染表面。g。以适当方法对桶消毒。f。尽快报告上级。

推荐微生物限度检查的心得体会和方法四

1.1学校的目的：

让我们在工厂里品尝到从未有过的苦头，也将学校里学到的理论知识和实验操作技能灵活地应用于寒假实习工作中。

1.2对我们成长的意义：

使我们明白在学校学到的东西要拿到社会上来用是远远不够用的，也不能解决一切问题。来到社会进行实习工作后，才理解社会为什么不像在学校那样单纯、简单。但是，对于科研方面在学校就要求比较复杂，而工厂的生产就讲就越简单越好，尽量节约科研的成本。

2.1**生物科技有限公司：

位于南宁市江南区吴圩明阳工业园，公司主要从事速生杏鲍菇培育，现将建成一间种菇房，面积约1200平方。

2.2他们的主营产品、服务、类型、成就：

速生杏鲍菇。该企业的虽然属于股份制有限责任公司，但是它却是拥有1000 万元注册资金的种苗生产型行业。那公司法人代表张生新负责用50名员工就开动了公司基础建设和初步运作。该公司在南宁市江南区吴圩镇出生于20xx年4月5日。

3.1实习的岗位：

在半个月的实习工作中，40%的时间里我是一名培养基配制员，50%的时间内我在进行的是隔菌盖的组装工作，还有10%的时间是用于干杂活。

3.2多样的工种：

接种员主要负责将试管里的菌种接入装有培养料的瓶中，并要求严格按照技术规程操作甲醛对接种室进行周期性循环杀毒灭菌。灭菌锅操作员主要负责受污染菌瓶的处理和无菌接种工作前的操作准备（对操作工具和培养基的灭菌）。

4.1配制种子培养基过程的工作。

（1） 准备好三个大水桶，并且装满水。

（2） 洗干净一个大盆、簸箕和一定数量的培养瓶备用

（3） 按配方，取定量麦粒等培养料，放入大锅里进行煮，直到用手捏时感到柔软即可。（水来源于其中一个大水桶）

（4） 将煮好的麦粒，倒入簸箕沥部分水就可倒入大盆，再加入定量的麦皮、木糠搅拌均匀，然后加清水达到适合湿度（用手捏一把时有水滴出），最后用石灰调整ph值（ph=7左右）。

（5） 选取质地形状规则的木条，放入一个加有石灰的大水桶（ph=7.5左右）中浸泡一个晚上后，倒去水就均匀撒上木糠备用。意味着当天所用的木条是昨天准备的。

（6） 先将25根木条平整放入培养瓶的一边，在向培养瓶空的一边装填培养料与木条齐平，擦干净瓶口后装上棉花塞。

（7） 装入灭菌锅里，进行食用菌培养基规范灭菌（0.5mpa时，排除冷空气；1.1~1.4mpa时，维持120~180分钟）。

4.2无菌操作：

（1）做好接种前的准备：

a、 在超净工作台外用75%的酒精或新洁尔灭将所有的材料瓶体擦拭一遍。

b、 将接种铲和接种锄用75%的酒精或新洁尔灭消毒后再用酒精灯灼烧灭菌。

c、 先用75%的酒精或新洁尔灭认真擦洗，尤其是手指、指缝和指甲。

d、 用75%的酒精或新洁尔灭擦拭工作台。用75%的酒精或新洁尔灭喷湿纱布或毛巾，准备擦拭工作台，先用湿纱布或毛巾擦拭工作台的过滤网。再就是工作台内的顶部，然后是两侧玻璃，最后是工作台的不锈钢台面。擦拭工作台必须按照一个方向进行。

（2）接种过程操作及后处理：

将灭菌后并冷却的接种铲和接种锄交换使用，从试管中取出菌种植入培养瓶中，再盖上棉花塞（此过程中，瓶口和棉花塞都要略微过一下火焰）。此外，接种过程中接种人员双手不能离开工作台，如果手离开台面拿培养基或材料时，再重新接种前先用75%的酒精或新洁尔灭擦拭。台面不要堆放太多待用的培养基或材料，人员尽可能少在其中走动，在接种时不能闲谈。

接种完毕后，把工作台清理干净，关闭各自工作台及电灯灯等室内所有不需要用的电器电源，将接菌瓶、接种日期、接种人员代号等标记清楚，并全部送到培养室记录，当天值日生必须将培养室和接种室及门前过道清理干净。

将所有使用过的培养瓶放置于指定的位置，把接种时废弃的培养基和材料统一倒入专用垃圾桶，清洗接种器具，晾干待用。

5.1在思想、道德和纪律方面：

我服从管理人员的工作安排和技术指导，吃苦耐劳、勤奋工作、团结同事；严格遵守公司的管理办法并按照各种操作流程进行操作；团结友爱、尊重同事、不做假、对工作不抵触，也不在培养室内吃东西；在公共场所举止文明、待人和善，爱护公司财产、节约水电等各种消耗物品的使用，杜绝浪费。

5.2在专业学习方面：

增加了我对《食用菌》这门过时学科的了解并向外拓展了新的知识并收获了宝贵的经验。

配制种子培养基过程时，我了解到了前期的准备工作十分重要，今日如果有工作遗漏将会严重影响下一天的工作进程。食用菌种子培养基的灭菌温度和时间与我们在实验室时对微生物和植物培养基，有些不同。如果灭菌不彻底绿色木霉、链孢霉、毛霉、曲霉、青霉、酵母菌会对杏鲍菇产生致命的危害……

5.3在实习工作的生活方面：

我是一个时间观念比较强的人，工作时间基本和生物钟同步进行。因此，我也感觉到了自己每天好像都在做着同一件事，不过也正是因为这样我才有规律性的工作生活节律。

我认识到了在实习中我所从事的工作是多种多样的，而又是食用菌培养技术实验生产化一系列的工作布局。这也是在让我从实习中进一步的认识到学科知识和技能在社会生产上的应用，还明白了我们不再是为了成绩而学习知识，而是为了创造而学习知识。食用菌培养技术只不过是生物技术对植物某方面的一个应用，另一大方面则应用于微生物，当然还有应用于动物那样高层次的基因工程。接种时，都要在相对无菌的环境下才能进行，原因是细菌的生命力比真菌的生命力异常强大，直接可以污染致死真菌。

6.1记忆的轮回：

回想在这段光辉岁月的实习的道路中，我虽然吃了不少的苦，但是我还是满载着经验和知识归来。

6.2崭新的突破：

我明白了本专业培养目标是培养掌握生物技术及应用专业必需的基础理论知识和基本技能，从事生物技术产品开发应用、检验分析、技术监督、生产管理等工作的高级技术应用性专门人才。 认识了本专业核心能力是生物技术产品开发和应用。

6.3未来的希望：

理解了本专业核心课程与主要实践环节是生物遗传学、生物化学基础、细胞生物学基础，、分子生物学、基因工程、生物制品分析测试、现代生化技术、仪器仪表施用及养护、发酵工程设备、化学和生物学实验、生产实习、野外实习、毕业实习、毕业设计等，以及各校的主要特色课程和实践环节。了解了就业面向是工业、医药、食品、环保等企事业和行政管理部门，从事生物技术产品开发、生物制品分析测试、生产管理和行政管理等工作。

7.1辞旧迎新：

本生物技术及应用专业知识每时每刻都在更新的，所以我们不能满足和局限于从课本上学到的知识，更要从百度大神、学术期刊网和ncbi中获得最新、最潮流、最时尚的生物技术及应用的相关知识、成就、产品。

7.2培养人才：

虽然说我们我专科生的教学是理论和实验各占50%，但是我感觉实验课程实在太少了，而且又做不到自由发挥，感到总是被套着做实验，没有创新。这当然不是老师的教学问题，只是我们平时不去关注生物技术相关资料而没有创新意识。理论知识教学不够生动形象，有时难以理解而感受到枯燥乏味，这个本质的原因还是我们的基础知识不够牢固，得靠自己上网自学来补救。

7.3内因外患：

内在因素是主要原因，但是一个巴掌拍不响，所以外在因素也是不可以小瞧的。系里面开展一些课余活动是有益于我们学习和生活的健康发展，但是过于开展第二课堂活动就荒废了我们正常的学习与生活，最后只会变得筋疲力尽、寸步难行。

7.4物极必反：

我的建议是开展活动要保证其质量，而不是其数量。并且要建立在不影响我们正常学习和休息的时候，要不然会使我们在大学中盲目不知道学习与活动孰轻孰重。虽然在活动中我们也可以学到许多东西，但是那些几乎都是综合能力的知识，真正本专业的知识还是的从教师的课堂来。而且现在社会分工是越来越细，对专业知识人才的需求量绝不会少于综合能力的人才。

7.5泛而专一：

我对本专业的专业知识、课程结构想法是泛而不失专一，即是不仅要广泛的学习，又要专攻一门将来想要发展的学科。原因是《微生物学》使我明白自己有时还不如微生物，因为它们从来不会做无用功；教《生物化学》的爱爱老师让我们领略到了手媒体的美妙；《发酵技术》教会我们利用微生物吃垃圾而产奶；教《生物分离纯化》的领导，是我们体会到了精品课程的上课模式；《植物组织培养技术》使我们有能力保护濒临灭绝的植物……

8.1自我反省：

在实习工作中，我发现自己还存在好吃懒做的问题。本想找出多余的自由时间放松一下，但又不按时按不量的完成本职工作；本想取得主管的信任，但又不认真不努力工作；本想和同事搞好工作关系，但是自己在工作中又特立独行。

8.2面向未来：

那在今后的日子里，我要以身边优秀的人物为榜样。不懒惰，主管下达的任务要立即完成，不能拖延。不推辞、不推脱难以完成的任务。竭尽全力完成自己的本职工作后，也争取做一些自己力所能及的事务。就算那要花掉自己的业余时间，那也在所不惜。

8.3敬岗爱业：

不要偷工减料，认真的完成主管安排的每一项工作，并保证其质量合格。无论客户对苗木品种要求如何，我一样态度为他服务；无论客户贫富贵贱，我都以一样的心态热情对待；无论客户的要求多么苛刻，我都会尽力做得更好。

8.4相互理解：

俗话说，在家靠亲人，在外靠朋友。多一个朋友，总比多一个敌人好。所以，在未来的工作生活中，我要尊重他人的人格尊严，有好的宽容的对待别人。在竞争中合作，才能让我有更高涨的热情投入于学习和工作去。

8.5春暖花开：

我总是特立独行、沉默不语，导致了我还对许多实习的工作细节不是十分的明确和清晰。所以，在未来的实习日子里，我应放下胆子、大胆提问、主动出击、积极工作。

推荐微生物限度检查的心得体会和方法五

1微生物室接种、培养、鉴定等有传染性风险操作必须在无菌室内进行，非本室工作人员严禁入内。

2 微生物室工作人员，在所有的细菌培养处理过程中都应戴乳胶手套，穿隔离衣，戴口罩，采取正确的自我保护措施。

3 拒收不符合要求的培养基、培养管等。

4必须在生物安全柜内进行细菌暴露性操作，严防操作产生可能含有高浓度的致病菌或真菌的气溶胶。

5严格执行微生物实验室技术操作规范、操作规程，自觉参加有关知识培训，及时更新知识。 6防止接触用于培养的塞子和胶带等可能含有高浓度的致病菌的一切物体。

7及时处理在培养过程中产生的污染物，严防病原微生物的扩散，微生物实验室的废弃物必须高压灭菌。

8发现可疑高致病性病原微生物时，必须立即向室负责人报告。

9发生实验室生物安全事故时立即按生物安全事故处理预案执行。

推荐微生物限度检查的心得体会和方法六

本期继续任教高三8、11两个班的生物。上期期末重庆市统考中，两班学生卷面成绩较期中有了较大幅度的提高。总的来看，学生在复习过程中知识得到升华，能力得到提高。通过第一轮复习，在基础知识的掌握上，大部分学生能达到相应的教学要求，对于考查生物学的基本概念、原理、实验方面与试题，得分率较高，但也暴露出一轮复习中存在的一些问题：

(1)部分学生将前一轮复习看作高二上课的重复工作，只满足于对一些基本知识演义的掌握上，不注重知识点之间的因果关系、运用条件和范围，以及相关知识点的联系和区别，一轮复习下来，各知识点仍是孤立的、零散的。

(2)不重视课本，学生在复习中关注的重点是复习资料，大部分时间忙于做题，对答案、提问上，对于一些基本概念、原理的理解仍停留在原先的水平上。如对什么叫性状分离、显性基因、杂合子仍是想当然，在解决考查概念的题型时，错误率较高。

(3)解题能力弱：在复习过程中，学生进行大量习题训练，做的题多，但对失误的地方不够重视，缺乏仔细分析过程，只关注答案，出现一错再错的现象，同时也暴露审题不严，答题不规范的问题。

1.教学内容：

本期主要进行高考专题复习及考前研练。专题复习的内容分为：1.生态环境。2.人与生物圈;

3.代谢、微生物与发酵工程;4.生物实验技术与方法;5.生物学前沿与发展。专题研练，通过分析高考命题特点和解题技巧，结合考前仿真研练提高能力。

1 重视知识的结构网络

根据信息加工理论，人类的记忆是一个信息加工系统。刺激过程是信息的输入，中枢过程是信息编码、存储，效应过程是信息的提取。处于无序状态下的知识，使大脑产生充塞感，思路难以开阔，易出现“翻开书本什么都懂，合上书又感觉什么都不会”的无为状态。教学中突出知识结构，不但可以使学生学到系统化的知识，较好地建立起各知识间的联系，更有利于对知识的理解、记忆和在应用时迅速提取。

2 重视知识的科学探究

科学探究活动通常是指学生们用以获取知识、领悟科学的思想观念、领悟科学家们研究自然界所用的方法而进行的各种活动。近几十年来，许多科学教育家都认为科学探究是学生学习科学的有效方式之一。科学探究重要的是在于它的过程而不完全是结果。通过科学探究激发学生学习兴趣，形成科学的思维方法，掌握了这种技能可以使人终身受用。

3 重视实验的分析设计

实验能力是一种综合能力。目前高考，虽然还不具备考查考生的实验操作能力。但非常重视实验内容的考查，如实验原理、实验程序、实验现象和实验结论等内容的分析。通过以往高考题的调查统计显示，学生对实验的理解能力、实验结果的分析和实验过程的设计能力有一定的差距。所以，教学中要重视实验的分析和设计。在复习中，要重视分析实验程序，认真分析实验中每一步骤的作用，每一处理的意义，以及各步骤之间的相互联系;既要知道怎么做，为什么这样做，还要想想换一种做法行不行，为什么?从中学会解决问题、研究问题的方法及寻求最佳方法的途径;要重视分析实验结果，既要重视对实验最终结果的记录，又要重视要求学生对实验的中间过程出现的现象进行记录，并重视对结果的分析以及对成功实验的分析，实验失败原因的查找;要重视设计实验程序，从 1教材中的经典实验入手，学习前人实验设计的好方法、好思路，不断进行实验设计练习，不断加强这方面的针对性训练，帮助学生理解并掌握实验设计的一般方法和规律，提高学生的实验能力，培养学生的创新精神和创新能力。

4 要重视解题的失误诊断

在平时的具体解题过程中，应认真分析“题示信息”，利用扎实的“基础知识”，进行缜密的“科学思维”，保持良好的“心态环境”，这些做好了，就会不出错或少出错。有的学生在解题中会出现各式各样的失误，如：知识记忆性失误;题示判断性失误;思维准确性失误等等。要认真分析学生失误的原因，因材施教，提高学生解决问题的能力。

在教学过程中要注意：

1.讲：知识网络、内在联系，改题思路，要防止借口基础差满堂灌。(课前要反思教案，如何上得更好)

2.练：试题要精编，要讲梯度，要微型试卷进课堂。一般不要用套题，剪刀加浆糊，制成微型卷(5-6个选择题，2-3个非选题)一堂课解决问题(考30-35分钟，评10分钟左右)。

3.评：做到正谬误，理思路，寻规律，求规范(学生尽可能地用生物学术语、观点答题)。

4.读：学生带着教师提出的跨度较大、知识迁移要求较高的问题，跳跃性地读结论性的语言、理解到位，在教师指导下回归教材，通过读，知道试题的来龙去脉。

5.思：在课堂教学中，要让学生有足够的时间对知识进行反刍和对试题进行反思，要诱发、唤起学生思考，教师还要一讲到底，象打机关枪。

6.辅：一个是阅视时个别解答和检查，二是练习的集中批改和面批面改，尤其是培优和转差的对象要耐心辅导。

推荐微生物限度检查的心得体会和方法七

一、学生情况分析：

本学期是学生学习生物学的起始。本学期的主要内容是引导学生在识别身边生物的基础上，描述生物的生命现象，认识生物圈中形形色色的动物、植物以及它们与人类的关系，这些知识是从学生的生活经验和认知水平出发，让学生在常见的生命现象层面上说出生物的基本特征、各类动植物的特征，了解生物的结构与功能想适应，建立结构与功能相适应的生物学观点。学生对于生物的生命现象已有不少感性认识，在教学过程中，教师要充分引导学生联系生活实际，理解生物的基本特征，找到学习生物的规律，培养自己的自主学习能力。 原因：

1、学生对生物比较感兴趣。

2、学生要有一个比较好的学习习惯，如课前预习，能完成实验报告册，课堂练习认真。

3、课堂管理也很关键，如果管理不好，再好的方法与技巧也无济于事。

4、注重通过课堂培优补差，以使部分成绩差的学生鼓足学习的勇气和信心。

5、注意学生的自主管理，同学间的团结合作意识很重要。

6、注重对生物知识的探究、观察，从感性到理性。

二、本学期的学习内容：

第一单元 认识生物

第一章：奇妙的生物现象

第一节 生物的基本特征

第二节 生物学的研究方法

第二章：严整的生命结构

第一节 显微镜的结构和使用

第二节 细胞的结构和功能

第三节 细胞的分裂和分化

第四节 多细胞生物体的结构层次

第三章：生物的生活环境

第一节 生物圈与栖息地

第二节 环境对生物的作用

第三节 生物对环境的适应与作用

第二单元 丰富多彩的生物世界

第一章：生物圈中的绿色植物

第一节 绿色植物的主要类群

第二节 绿色植物的蒸腾作用

第三节 绿色植物的光合作用

第四节 绿色植物的呼吸作用

第五节 绿色植物在生物圈中的作用

第二章：生物圈中的动物

第一节 动物的主要类群

第二节 动物的运动

第三节 动物的行为

第四节 动物在生物圈中的作用

第三章：生物圈中的微生物

第一节 病毒

第二节 细菌

第三节 真菌

第四节 细菌、真菌在生物圈中的作用

第四章：生物的分类

三、新课标对本学期内容的要求：

1、理解科学探究：体验到科学探究是人们获取科学知识、认识世界的重要途径；意识到提出问题是科学探究的基础，解决科学问题常常需要作用假设。科学探究要通过观察、实验、调查等多种途径来获取，同时也需要进行推理和判断；更需要正确地表达、需要与人交流与合作。

2、理解有关细胞的知识，教师为学生提供机会，引导学生探究动植物细胞的结构和功能，初步学会显微观察的方法和技能，激发探究的兴趣。

3、指导学生用调查和观察的方法，加深到生物与环境关系的认识。让学生形成热爱大自然、爱护生物的情感、理解人与自然和谐发展的意义以及提高环境保护意识十分重要。

4、加深学生对生物圈中绿色植物相关知识的理解，提高学生运用知识解决实际问题的能力。

5、理解生物结构与功能的统一性，并注意引导学生到周围环境中去观察动物的动物和行为，培养学生的观察能力和学习兴趣。

6、理解病毒、细菌、真菌的形态结构特点及与人类的关系；细菌真菌在生物圈中的作用。

四、认识领域：

获得有关生物体的结构层次、生命活动、生物与环境、生物进化以及生物技术等生物学基本事实概念、原理和规律的基础知识。

知识生物科学技术在生活、生产和社会发展中的应用及其可能产生的影响。

五、情感领域：

1、了解我国的生物资状况和生物科学技术发展的状况，培养爱祖国、爱家乡的情感，增强振兴祖国和改变祖国面貌的使命感与不责任感，提高环保意识；乐于探索生命的奥秘，具有实事求是的科学态度、一定的精神和创新意识。

2、关注与生物学有关的社会问题，初步形成主动参与社会决策的意识，逐步养成良好的生活习惯与卫生习惯，确立积极、健康的生活态度。

六、能力领域：

1、通过科学探究实验培养学生的观察、实验、动手操作能力。

2、根据自己所学的卫生保健知识，指导自己的生活实践。

3、让学生初步具有收集和利用课内外的图文资料及其他信息的能力。

4、初步学生科学探究的一般方法，培养学生的科学探究能力。在科学中发展合作能力、实践能力和创新能力。

七、本学期的主要措施：

1、提高课堂效率，向课

堂45分钟要质量。

2、激发学生的学习兴趣，进而形成为志趣。

3、利用课外活动时间让学生科学探究，学生探究的一般方法。

4、加强优化课堂教学的研讨工作，以使每一位学生在课堂上都尽可能多地掌握知识。

5、扎实落实好新的教学改革，将新课改落实到每一节课。

6、加强教材研讨的力度，使自己能灵活把握新教材，教学时做到“游刃有余”。

八、教学进度表：见下页。

学期教研课题及重大教学

活动安排：

一、教研课题：

1、加大课改力度，提高教育教学能力，争取课堂教学改革有较大成效。

2、努力进行校本教研。

二、重大活动安排：

1、加强集体备课的力度，发挥其优势。

2、积极进行教学研究，探索新的适合学生的特点的教学方法。

3、积极听评课，进行课堂研究。

4、扎实落实教务处的各项常规。

推荐微生物限度检查的心得体会和方法八

甲方：_______________市_____股份有限公司，地址：_______________市__________路_____号。

乙方：_______________市y股份有限公司，地址：_______________市__________路__________街__________号。

上述双方公司系原__________市z股份有限公司。___ 年 ___ 月 ___ 日该公司股东大会决议，将原z股份有限公司分立为：_______________市_____股份有限公司与__________市y股份有限公司。现分立的双方就分立的有关事宜达成如下协议：

一、原z公司注册资金为___________万元，现有净资产___________万元，由__________市_____股份有限公司接受___________万元，__________市y股份有限公司接受___________万元。

二、_____股份有限公司将发行新股___________万元，若股票发行成功，该公司注册资金总额为___________万元，新股为人民币普通股票，每股面值1元，向社会个人公开发行。

y股份有限公司将发行新股___________万元，若股票发行成功，该公司注册资金总额为___________万元，新股人民币普通股票，每股面值1元，向社会个人公开发行。

三、原公司发行股票___________万股，现每两股折合一新股，按股票号码顺序，前___________万号股票持有者向_____股份有限公司兑换新股，___________万号以后的股票持有者向y股份有限公司兑换新股。

四、分立后_____股份有限公司主要生产西药制剂，y股份有限公司主要生产中药和微生物药品，原公司下属第一制药厂归_____公司管理;下属第二制药厂由y公司经营管理。

五、进行分立的日程为：___ 年 ___ 月 ___ 日到 ___ 日双方共同清理财产帐册，对原公司财产进行分割，并按期交割完毕。___ 年 ___ 月 ___ 日起原z股份有限公司将不复存在，_____股份有限公司，y股分有限公司正式营业。

六、原z股份有限公司分立过程中，双方难免产生矛盾，应本着“互谅互让”的原则，不影响工厂生产，分立各方不得以任何理由影响生产正常进行，一切都应友好协商进行。

七、分立各方要求原公司股东大会应在___ 年 ___ 月 ___ 日前批准本合同。

甲方：_______________市_____股份有限公司

负责人：_______________张__________

乙方：_______________市y股份有限公司

负责人：_______________李__________

_____________年__________月__________日