血清实验室检测协议书如何写 实验室血清学检测方法(9篇)

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2023年血清实验室检测协议书如何写一

用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。

下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：

一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。

二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。

三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。

四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。

一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔v型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。

二、方法：

1%鸡红血球的制备：

1.用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例为1∶3～4。

2.洗血球：共洗4～5次，每次5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为1∶2～3。离心机转速为每分钟1500～3000转，最后倾去上清。

3.吸红血球泥1ml加生理盐水99ml，配成1%红血球备用。

三、血凝试验：

1.血凝板上12个孔内全部加入生理盐水，每孔0.05ml，吸等量新城疫抗原于第一孔内，混匀后吸出同量于第二孔内混匀，以此类推稀释至第11孔，并弃去0.05ml，留第12孔作为生理盐水对照，然后全部孔内加入1%鸡红血球。

2.将血凝板置于振荡器上振荡1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培养箱，每5分钟观察一次，至10～15分钟取出，一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。

3.结果判定：红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集（++）。

4.出现完全凝集的抗原的最高稀释度，即为该抗原的凝集价。

5.四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），则前移2孔即26（64），作为四单位抗原的稀释度。即：63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。

四.血凝抑制试验：

1.血凝板上1～11孔全部加入0.05ml的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗体，稀释至第10孔，弃去0.05ml，再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔，第11孔为抗原对照，12孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡1～2分钟，放置室温约20分钟，然后加入等量的1%鸡红血球，振荡后放入恒温培养箱大约10～15分钟后进行结果判定。

2.结果：能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的最高稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。

注：1、hi价在23～24时免疫可产生良好的免疫应答，如在疫区可提高到24～25免疫。

2、24～25hi210时为最好。3、如hi价高于211则为强毒污染。

注：#为完全抑制，++为不完全抑制，－为不抑制。

2023年血清实验室检测协议书如何写二

禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。

1、取96孔90°v形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μl pbs液。

2、吸取25 μl标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。

3、从第1孔吸取25 μl混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μl加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μl。第三排孔至第四排孔同上操作。

4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μl 1%的鸡红细胞悬液。

5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。

6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（hau）

1、根据血凝试验结果配制4hau抗原。（即1hau抗原除以4）

2、取96孔v形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μl pbs。

3、在第1孔加入25 μl被检血清，充分混匀后移出25 μl加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μl。

4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。

5、在第1~12孔各加入25 μl 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。

6、每孔加入25 μl 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。

7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。 将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。

1样品的保存及试验前处理

1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。

1.2 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。

1.3 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。

1.4 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。不建议直接吸取其中少量的清亮血清。

1.5 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。具体操作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。

2器材的选择

2.1 酶标板的选择：

建议使用96孔90°v型板进行试验，通过反复试验证明：90°v型板相对于110°板及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。

2.2 移液枪的选择及使用：

①单道、多道可调微量移液枪应选择合适的量程，以便精确度的提高。

②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。吸取液体时，枪头要深入液下缓慢平稳吸液。加缓冲液时

应加在板孔底部。倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，影响试验结果。

③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。

3试剂的保存及配置

3.1 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。

3.2 ph7.2、0.01mol/l的pbs液的制备

①应尽量现用现配

②每次使用前应测ph值，以免时间过长而导致ph值发生改变。

③由于ph试纸跨度范围偏大，ph值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量ph值，以提高试验的精确度。

④全部试验均采用同一种稀释液。

3.3 1%红细胞的制备

①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取2-3只spf鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然采血的前提条件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。

②采血完毕后最好分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与1.5ml两种容量离心管相比较，放入1.5ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的pbs液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。

③经20xx~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的pbs液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。

④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。

⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。

3.4抗原液的配制

①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1hua抗原，配制4hua抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。

②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。

③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1~8孔各加25微升pbs，取4hau抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。从第2至第8孔补25微升pbs，以保持75微升总量不变，另一排同样。两排的第1至第8孔各加25微升1%红细胞，震荡10秒钟。静置30分钟观察结果。这样在第1孔为4hau抗原，第2孔为2hau抗原，第3孔为1hau抗原，第4孔为1/2hau抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。

4结果的判定

每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。判读结果时，将酶标板倾斜45°，以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。

5试验器具的清洗

每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3%naoh中4小时，清水反复冲净，再放入3%hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸馏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。

在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。

2023年血清实验室检测协议书如何写三

随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及操作方法。

用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。

下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：

一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。

二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。

三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。

四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。

一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔v型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。

二、方法：

1%鸡红血球的制备：

1.用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例为1∶3～4。

2.洗血球：共洗4～5次，每次5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为1∶2～3。离心机转速为每分钟1500～3000转，最后倾去上清。

3.吸红血球泥1ml加生理盐水99ml，配成1%红血球备用。

三、血凝试验：

1.血凝板上12个孔内全部加入生理盐水，每孔0.05ml，吸等量新城疫抗原于第一孔内，混匀后吸出同量于第二孔内混匀，以此类推稀释至第11孔，并弃去0.05ml，留第12孔作为生理盐水对照，然后全部孔内加入1%鸡红血球。

2.将血凝板置于振荡器上振荡1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培养箱，每5分钟观察一次，至10～15分钟取出，一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。

3.结果判定：红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集（++）。

4.出现完全凝集的抗原的最高稀释度，即为该抗原的凝集价。

5.四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），则前移2孔即26（64），作为四单位抗原的稀释度。即：63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。

四.血凝抑制试验：

1.血凝板上1～11孔全部加入0.05ml的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗体，稀释至第10孔，弃去0.05ml，再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔，第11孔为抗原对照，12孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡1～2分钟，放置室温约20分钟，然后加入等量的1%鸡红血球，振荡后放入恒温培养箱大约10～15分钟后进行结果判定。

2.结果：能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的最高稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。

注：1、hi价在23～24时免疫可产生良好的免疫应答，如在疫区可提高到24～25免疫。

2、24～25hi210时为最好。3、如hi价高于211则为强毒污染。

注：#为完全抑制，++为不完全抑制，－为不抑制。

2023年血清实验室检测协议书如何写四

血压测量的实训报告

姓名： 性别： 班级： 学号：

实训内容：血压测量（水银台式血压计）

实训地点：护理实训楼437农村医学实训室

实训日期：年月号

一、实验目的

1.通过学习，使我们掌握血压计使用的正确方法

2.加深自己的体验过程，要熟练血压的测量目的，要为自己在生活中或工作做好准备。

3.了解人体血压的测量方法及相关知识，达到理论与实际相结合的目的。

二、实验要求

1.保持实验室的安静。

2.要爱护实验室的器材，尽量要做到实验室器材不要损坏。

3.认真听和看老师示范的方法，注意老师讲的注意事项。

4.实验结束后注意学会分析总结和会使用血压计。

三、实验对象和器材

实训对象：

实训器材：听诊器、血压计

四、实训过程：

1.先让测血压的人保持情绪稳定。

2.把盒子打开，再把水银柱的最下边银色水银槽的开关打开。

3.被测者脱去一只衣袖，将前臂平放在桌子上，与心脏在同一水平位，掌心向上半握拳。测验着要和被测者在同一水平，将袖带缠住该上臂处，大约距肘横纹2-3cm，松紧以恰能放进一个手指为宜。

4. 将听诊器置于肘窝部、肱二头肌肌腱内侧的肱动脉搏动处, 轻压之。

5. 旋紧与气囊相连的气球充气旋钮，并开始充气。气囊充气过程中应同时听诊肱动脉搏动音，观察汞柱上升高度。待肱动脉搏动音消失后，汞柱再升高20～30mm；然后以恒定的速率缓慢放气。在心率缓慢者，放气速率应更慢些。使水银柱下降，视线与水银柱刻度平行.

总结：实训对象的血压是否正常？

篇二：人体生理学 abo 血型与动脉血压实验报告

abo血型鉴定与动脉血压测量综合实验

摘要 本实验采用波片法鉴定人体abo血型和汞式压力表测定人体动脉血压。被测者血液遇抗a血清和抗b血清均不凝集，汞式压力表在压紧被测者上臂后松开第一次听到声音时读数110mmhg，声音消失处读数70mmhg。实验表明，该被测者血型为o型，动脉血压为110/70mmhg。

关键词 abo血型血压玻片法汞式压力表

前言

人类红细胞上存在两种abo血型系统的抗原，又称为凝集原（agglutinogen），分别是a抗原和b抗原。根据红细胞膜上含有抗原类型的不同，可将血型分为四型：仅有a抗原者为a型，仅有b抗原者为b型，两种抗原均有者为ab型，两者抗原均无者为o型。血型可作为机体免疫系统鉴别“自我”和“异己”的标志。在临床上，血型鉴定是进行输血和组织、器官移植成败的关键。在人类学、法医学研究上，血型鉴定也具有重要意义。

动脉血压（arterial blood pressure）是指血流对动脉管壁的侧压力。在一个心动周期中，动脉血压随着心室的舒缩而发生规律性的波动。在心缩期内，动脉血压上升达到的最高值称为收缩压（systolic pressure）；在心舒期内，动脉血压下降达到的最低值为舒张压（diastolic pressure）。动脉血压过高或过低都会影响各器官的血液供应和心脏血管的负担，如动脉血压过低，将引起器官组织血液供应减少，尤其是造成脑、心、肾、肝等重要器官的供血不足，将引起器官的功能障碍和衰竭。血压过高，则心脏和血管的负担过重。长期高血压患者往往引起心室代偿性肥大，心功能不全，甚至心力衰竭。所以保持动脉血压处于正常的相对稳定状态是十分重要的[1]。学习如何测量动脉血压，对于掌控被测者动脉血压的变化，从而预防和控制疾病具有积极意义。

1 实验目的及原理

1.1 abo血型鉴定

血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在abo血型系统中，红细胞膜上抗原分a和b两种抗原，而血清抗体分抗a和抗b两种抗体。a抗原加抗a抗体或b抗原加抗b抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准a型血清（含有抗b抗体）与标准b型血清（含有抗a抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无a或/和b抗原。在abo血型系统，根据红细胞膜上是否含a、b抗原而分为a、b、ab、o四型，如表1。

表1

1.2 动脉血压测定

学习间接测量法（听诊法）测定人体动脉血压原理，并实际测定人体肱动脉的收缩压和舒张压的正常值。间接法测量动脉血压原理是用血压计的袖带在所测动脉外施加压力，再根据血管音的变化来测定血压。通常血液在血管内流动时听不到声音，但如果在血管外施加压力使血管变窄，则血流通过狭窄处形成涡流可发出声音。当缠于上臂血压计袖带内压力超过收缩压时，完全阻断了肱动脉的血流，此时在肱动脉的远端（袖带下）听不到声音，也触不到肱动脉的脉搏。当徐徐放气减小袖带内压，在其压力减低到低于肱动脉收缩压的瞬间，血液在血压达到收缩压时才能通过被压迫变窄的肱动脉，形成涡流，此时能在肱动脉的远端听到声音和触到脉搏，此时袖带内压力的读数为收缩压。若继续放气，当袖带内的压力越接近于舒张压，通过的血流量也越多，血流持续时间越长，听到的声音也越清晰。当袖带内压力等于或稍低于舒张压的瞬间，血管内血流由断续的流动变为连续流动，此时声音突然由强变弱或消失，脉搏也随之恢复正常，此时袖带内的压力为舒张压（图1）。

2实验器材和药品

1） 仪器 显微镜，离心机。

2） 器械 采血针，消毒注射器，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔，血压计，听诊器，桌椅。

3） 药品 标准a血清，标准b血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。

3实验步骤

3.1玻片法abo血型鉴定

（1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明a及b，并分别各滴入a及b标准血清一滴。

（2） 细胞悬液制备 从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。

（3） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。

（4） 竹签两头分别混合，搅匀。

（5） 10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。

（6） 判断血型 根据被试者红细胞是否被a，b型标准血清所凝集，判断其血型。

3.2 动脉血压测定

3.2.1 熟悉血压计的结构

常用血压计有两种类型，常用的是汞柱式血压计（图2），另一种是弹簧式血压计（图4-1-3-3）。前者比较精确，后者方便携带。两种血压计均由检压计、袖带和橡皮气球三部分组成。汞柱式血压计的检压计是一个标有0~40 kpa（0~300 mmhg）（1mmhg=0.133kpa,1kpa=7.5mmhg）刻度的玻璃管，上端与大气相通，下端与水银贮槽相通。袖带是一个外包布套的长方形橡皮囊，借橡皮管分别和检压计的水银槽及橡皮球相通。橡皮球是一个带有螺丝帽的球状橡皮囊，供充气和放气之用。近年来又有一种新型的电子血压计在临床上应用。

图1 间接法测量血压原理示意图 图 2 汞柱式血压计及弹簧式血压计

3.2.2听诊法测量动脉血压

1）受试者脱去右臂衣袖，取坐位，全身放松，右肘关节轻度弯曲，置于实验桌上，使上臂中心部与心脏位置同高。

2） 打开血压计，松开血压计橡皮球的螺丝帽，驱出袖带内残留气体，后将螺丝帽旋紧。

3）将袖带平整、松紧适宜地缠绕右上臂，带下缘至少位于肘关节上2cm处，开启水银槽开关。

4）将听诊器两耳器塞入外耳道，务必使耳器弯曲方向与外耳道一致。

5）在肘窝内侧先用手触及肱动脉搏动所在部位，再将听诊器胸器不留缝隙地轻轻贴在上面。

6）测量收缩压：挤压橡皮球将空气打入袖带内，使血压表上水银柱逐渐上升到听诊器听不到脉搏音为止，再继续打气使水银柱再升2.7~4.0kpa（20~30mmhg）。随即慢慢松开气球螺丝帽，徐徐放气，在观察水银柱缓缓下降的同时仔细听诊，在听到“崩”样第一声清晰而短促脉搏音时，血压表上所示水银柱高度即代表收缩压。

7）测量舒张压：使袖带继续徐徐放气，这时声音先依次增强，后又逐渐减弱，最后完全消失。在声音突然由强变弱（或声音变调）这一瞬间，血压表上所示水银柱高度代表舒张压。也有人把声音突然消失时血压计上所示水银柱高度作为舒张压，若取后者，需另外0.67kpa（5 mmhg）较妥。

8）血压记录常以收缩压/舒张压kpa表示，如收缩压、舒张压分别为14.70kpa（110mmhg）和9.33kpa（70mmhg），记为14.70/9.33kpa（110/70mmhg）

9）列表记录你所测得同学的血压。

4 注意事项

4.1 abo血型鉴定

1）所用双凹玻片的试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。

2）a及b标准血清绝对不能相混，所用滴管上贴橡皮膏标明a及b、红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。

4.2 动脉血压测定

1）室内务必保持安静，测量血压前需嘱受试者静坐放松，以排除体力活动及精神紧张对血压的影响。

2）袖带宽度应为12cm，袖带缠绕不能太紧或太松。听诊器胸器最好用膜型。安放时既不能压得太重，也不能接触过松，更不能压在袖带底下进行测定。

3）需要连续测定2~3次，取其最低值或平均值。重复测定时，袖带内压力必须降至零后再打气。

4）发现血压超过正常范围时，应将袖带解下，让受试者休息10min后再测。

5）血压计用毕应将袖带内气体驱尽、卷好、放置盒内，以防玻璃管折断；并关闭水银贮槽。 5结果与分析

5.1 abo血型鉴定

实验结果如图3所示，该被测者血液遇抗a血清和抗b血清均不发生凝集，故该被测者血液中红细胞既无a抗原，有无b抗原，由此判断该被测者血型为o型。

2023年血清实验室检测协议书如何写五

随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及操作方法。

用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。

下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：

一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。

二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。

三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。

四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。

一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔v型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。

二、方法：

1%鸡红血球的制备：

1.用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例为1∶3～4。

2.洗血球：共洗4～5次，每次5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为1∶2～3。离心机转速为每分钟1500～3000转，最后倾去上清。

3.吸红血球泥1ml加生理盐水99ml，配成1%红血球备用。

三、血凝试验：

1.血凝板上12个孔内全部加入生理盐水，每孔0.05ml，吸等量新城疫抗原于第一孔内，混匀后吸出同量于第二孔内混匀，以此类推稀释至第11孔，并弃去0.05ml，留第12孔作为生理盐水对照，然后全部孔内加入1%鸡红血球。

2.将血凝板置于振荡器上振荡1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培养箱，每5分钟观察一次，至10～15分钟取出，一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。

3.结果判定：红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集（++）。

4.出现完全凝集的抗原的最高稀释度，即为该抗原的凝集价。

5.四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），则前移2孔即26（64），作为四单位抗原的稀释度。即：63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。

四.血凝抑制试验：

1.血凝板上1～11孔全部加入0.05ml的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗体，稀释至第10孔，弃去0.05ml，再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔，第11孔为抗原对照，12孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡1～2分钟，放置室温约20分钟，然后加入等量的1%鸡红血球，振荡后放入恒温培养箱大约10～15分钟后进行结果判定。

2.结果：能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的最高稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。

注：1、hi价在23～24时免疫可产生良好的免疫应答，如在疫区可提高到24～25免疫。

2、24～25hi210时为最好。3、如hi价高于211则为强毒污染。

注：#为完全抑制，++为不完全抑制，－为不抑制。

2023年血清实验室检测协议书如何写六

流感病毒颗粒表面的血凝素（ha）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，ha试验由此得名。ha蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰ha蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。

该试验是目前who进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株ha亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。

只有当抗原和抗体ha亚型相一致时才能出现hi现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。

1  阿氏（alsevers）液配制

称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml，散热溶解后调ph值至6.1，

69kpa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kpa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。

2  10%和1%鸡红细胞液的制备

2.1采血

用注射器吸取阿氏液约1ml（3.8%枸橼酸钠），取至少2只spf鸡（如果没有spf鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4ml，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10ml阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞

将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 ml（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

2.3  10%鸡红细胞悬液

取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(ml)，加入9倍体积(ml)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步

可省略，直接配制1%红细胞）

2.4  1%鸡红细胞液

取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 ml，加入9 ml生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）

3 抗原血凝效价测定（ha试验，微量法）

3.1 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl pbs（生理盐水），换滴头。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。

3.3从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。

3.4每孔再加入25μl pbs（生理盐水）。

3.5每孔均加入25μl 体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。

3.6振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。

3.7结果判定  将板倾斜，观察血凝板，判读结果。

能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（hau）。注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。

4 血凝抑制（hi）试验（微量法）

4.1 根据3的试验结果配制4hau的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4hau的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4hau抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。

4.2 在微量反应板的1孔～11孔加入25μl pbs（生理盐水），第12孔加入50μl pbs（生理盐水）。

4.3 吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。

4.4 1孔～11孔均加入含4hau抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。

4.5 每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。

4.6 结果判定

试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。

以完全抑制4hau抗原的血清最高稀释倍数作为hi滴度。

hi价小于或等于31og2判定hi试验阴性；hi价大于或等于41og2为阳性。

1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对re-4和re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。

同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的hi效价较高。

2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。

3、反应温度不能太高。若在37℃ （如温箱）下进行，

2023年血清实验室检测协议书如何写七

禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。

1、取96孔90°v形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μl pbs液。

2、吸取25 μl标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。

3、从第1孔吸取25 μl混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μl加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μl。第三排孔至第四排孔同上操作。

4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μl 1%的鸡红细胞悬液。

5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。

6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（hau）

1、根据血凝试验结果配制4hau抗原。（即1hau抗原除以4）

2、取96孔v形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μl pbs。

3、在第1孔加入25 μl被检血清，充分混匀后移出25 μl加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μl。

4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。

5、在第1~12孔各加入25 μl 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。

6、每孔加入25 μl 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。

7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。 将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。

1样品的保存及试验前处理

1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。

1.2 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。

1.3 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。

1.4 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。不建议直接吸取其中少量的清亮血清。

1.5 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。具体操作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。

2器材的选择

2.1 酶标板的选择：

建议使用96孔90°v型板进行试验，通过反复试验证明：90°v型板相对于110°板及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。

2.2 移液枪的选择及使用：

①单道、多道可调微量移液枪应选择合适的量程，以便精确度的提高。

②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。吸取液体时，枪头要深入液下缓慢平稳吸液。加缓冲液时

应加在板孔底部。倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，影响试验结果。

③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。

3试剂的保存及配置

3.1 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。

3.2 ph7.2、0.01mol/l的pbs液的制备

①应尽量现用现配

②每次使用前应测ph值，以免时间过长而导致ph值发生改变。

③由于ph试纸跨度范围偏大，ph值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量ph值，以提高试验的精确度。

④全部试验均采用同一种稀释液。

3.3 1%红细胞的制备

①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取2-3只spf鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然采血的前提条件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。

②采血完毕后最好分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与1.5ml两种容量离心管相比较，放入1.5ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的pbs液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。

③经20xx~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的pbs液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。

④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。

⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。

3.4抗原液的配制

①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1hua抗原，配制4hua抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。

②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。

③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1~8孔各加25微升pbs，取4hau抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。从第2至第8孔补25微升pbs，以保持75微升总量不变，另一排同样。两排的第1至第8孔各加25微升1%红细胞，震荡10秒钟。静置30分钟观察结果。这样在第1孔为4hau抗原，第2孔为2hau抗原，第3孔为1hau抗原，第4孔为1/2hau抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。

4结果的判定

每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。判读结果时，将酶标板倾斜45°，以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。

5试验器具的清洗

每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3%naoh中4小时，清水反复冲净，再放入3%hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸馏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。

在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。

2023年血清实验室检测协议书如何写八

流感病毒颗粒表面的血凝素（ha）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，ha试验由此得名。ha蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰ha蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。

该试验是目前who进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株ha亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。

只有当抗原和抗体ha亚型相一致时才能出现hi现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。

1  阿氏（alsevers）液配制

称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml，散热溶解后调ph值至6.1，

69kpa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kpa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。

2  10%和1%鸡红细胞液的制备

2.1采血

用注射器吸取阿氏液约1ml（3.8%枸橼酸钠），取至少2只spf鸡（如果没有spf鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4ml，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10ml阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞

将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 ml（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

2.3  10%鸡红细胞悬液

取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(ml)，加入9倍体积(ml)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步

可省略，直接配制1%红细胞）

2.4  1%鸡红细胞液

取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 ml，加入9 ml生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）

3 抗原血凝效价测定（ha试验，微量法）

3.1 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl pbs（生理盐水），换滴头。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。

3.3从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。

3.4每孔再加入25μl pbs（生理盐水）。

3.5每孔均加入25μl 体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。

3.6振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。

3.7结果判定  将板倾斜，观察血凝板，判读结果。

能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（hau）。注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。

4 血凝抑制（hi）试验（微量法）

4.1 根据3的试验结果配制4hau的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4hau的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4hau抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。

4.2 在微量反应板的1孔～11孔加入25μl pbs（生理盐水），第12孔加入50μl pbs（生理盐水）。

4.3 吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。

4.4 1孔～11孔均加入含4hau抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。

4.5 每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。

4.6 结果判定

试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。

以完全抑制4hau抗原的血清最高稀释倍数作为hi滴度。

hi价小于或等于31og2判定hi试验阴性；hi价大于或等于41og2为阳性。

1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对re-4和re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。

同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的hi效价较高。

2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。

3、反应温度不能太高。若在37℃ （如温箱）下进行，

2023年血清实验室检测协议书如何写九

流感病毒颗粒表面的血凝素（ha）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，ha试验由此得名。ha蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰ha蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。

该试验是目前who进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株ha亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。

只有当抗原和抗体ha亚型相一致时才能出现hi现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。

1  阿氏（alsevers）液配制

称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml，散热溶解后调ph值至6.1，

69kpa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kpa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。

2  10%和1%鸡红细胞液的制备

2.1采血

用注射器吸取阿氏液约1ml（3.8%枸橼酸钠），取至少2只spf鸡（如果没有spf鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4ml，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10ml阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞

将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 ml（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

2.3  10%鸡红细胞悬液

取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(ml)，加入9倍体积(ml)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步

可省略，直接配制1%红细胞）

2.4  1%鸡红细胞液

取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 ml，加入9 ml生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）

3 抗原血凝效价测定（ha试验，微量法）

3.1 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl pbs（生理盐水），换滴头。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。

3.3从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。

3.4每孔再加入25μl pbs（生理盐水）。

3.5每孔均加入25μl 体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。

3.6振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。

3.7结果判定  将板倾斜，观察血凝板，判读结果。

能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（hau）。注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。

4 血凝抑制（hi）试验（微量法）

4.1 根据3的试验结果配制4hau的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4hau的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4hau抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。

4.2 在微量反应板的1孔～11孔加入25μl pbs（生理盐水），第12孔加入50μl pbs（生理盐水）。

4.3 吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。

4.4 1孔～11孔均加入含4hau抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。

4.5 每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。

4.6 结果判定

试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。

以完全抑制4hau抗原的血清最高稀释倍数作为hi滴度。

hi价小于或等于31og2判定hi试验阴性；hi价大于或等于41og2为阳性。

1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对re-4和re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。

同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的hi效价较高。

2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。

3、反应温度不能太高。若在37℃ （如温箱）下进行，