微生物制剂的协议书模板(5篇)

无论是身处学校还是步入社会，大家都尝试过写作吧，借助写作也可以提高我们的语言组织能力。范文书写有哪些要求呢？我们怎样才能写好一篇范文呢？以下是我为大家搜集的优质范文，仅供参考，一起来看看吧

微生物制剂的协议书模板(精)一

（一）知识与技能

1．了解传统发酵技术在日常生活中的应用。

2．掌握发酵作用的基本原理和方法。

3．学习制作果酒、果醋的实际操作技能。

4．设计并安装简单的生产果酒及果醋的装置

（二）过程与方法

1．引导学生主动参与探究过程，培养学生搜集和处理科学信息的能力，获取新知识的能力以及用简约科学术语表达问题的能力。

2．培养学生综合分析能力。

3．培养学生利用已建立的知识解决实际问题的能力。

（三）情感、态度与价值观

1．对学生进行科学方法和科学态度的教育。

2．体验和感受生物技术给人类生活带来的变化。

3．培养学生合作精神。。

二、教学重点

说明果酒和果醋的制作原理，设计制作装置，制作出果酒和果醋

三、教学难点

制作过程中发酵条件的控制

四、教学方法

启发式教学

五、教学工具

多媒体课件

六、教学过程

（一）引入新课

俗语“无酒不成席”、“开门五件事、油盐酱醋茶”。酒和醋是人们日常生活离不开的传统发酵产品。从这节课开始，我们以果酒、果醋等为例学习一些传统发酵技术。

（二）进行新课

（阅读“果酒制作的原理”，引导考学生自学基础知识。）

1．基础知识

1．1果酒制作原理

（1）利用的微生物是酵母菌，其异化作用类型是兼性厌氧型，明确酵母菌发酵的反应式：①有氧条件：

②无氧条件：

（2）影响酒精发酵的主要环境条件有温度、氧气和ph。

①酒精发酵是一般将温度控制在18～25℃范围内，在20℃时最适宜。

②酒精发酵过程中，要保持缺氧、酸性环境。

（阅读教材资料，师生讨论并完成思考1～4。）

〖思考1〗为什么在酒精发酵过程中往往“先通气后密封”？

“通气”的目的是使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖。

“密封”的目的是使酵母菌进行无氧呼吸产生酒精。

〖思考2〗酒精发酵过程中发生“先来水后来酒”现象，其原因是什么？

酵母菌首先进行有氧呼吸产生了水，然后进行无氧呼吸才产生酒精。

〖思考3〗葡萄酒呈现深红色的原因？

在发酵过程中葡萄皮的色素进入到发酵液中。

〖思考4〗酵母菌是如何进行生殖的？

酵母菌在环境适宜时进行出芽生殖，环境不适宜时产生孢子进入休眠状态。

（阅读果醋制作的原理，引导考学生自学基础知识）

1．2果醋制作原理

（1）利用的微生物是醋酸菌，其异化作用类型是需氧型。在氧气和糖源都充足时，降糖分解形成醋酸；当缺少糖源时可将乙醇转变成乙醛，并进一步转变成醋酸。明确醋酸发酵的反应式。

（2）醋酸发酵的最适宜温度为30～35℃。

（师生讨论并完成思考5～6）

〖思考5〗影响醋酸发酵的环境因素还有哪些？氧气和ph。

〖思考6〗醋瓶子、未喝干的啤酒瓶子放置久了，在醋和啤酒表面形成一层“白膜”。它是怎样形成的？醋酸菌大量繁殖形成的。

2．实验设计

2．1实验流程

课件展示流程图

（讨论并完成思考7，提问）

〖思考7〗酒精发酵和醋酸发酵的区别和联系：

（阅读［资料］，学生讨论完成发酵过程的设计。）

2．2设计发酵装置：根据图1－4a、4b回答

（1）在酒精发酵过程中，每隔一段时间（12h）拧松瓶盖或打开排气口，其原因是什么？在发酵过程中产生co2，防止瓶内气压过高引起爆裂。

（2）在醋酸发酵过程中，需要注意什么？

要持续向发酵液中补充氧气。

（3）在图1－4b装置中：

①充气口的作用是在醋酸发酵中补充氧气；

②排气口的作用是在发酵中排出co2或残余气体；

③出料口的作用是便于取样检查和放出发酵液；

④排气口胶管长而弯曲的作用是防止防止空气中杂菌感染。

3．发酵操作

3．1材料选择和处理

选择新鲜优质的葡萄，然后依次冲洗、除去枝梗和榨汁。

〖思考9〗先冲洗后去枝梗的目的是什么？防止杂菌感染。

3．2防止发酵液被污染

为防止发酵液被杂菌污染，实验中所用的榨汁机、发酵装置等器械进行消毒，并使发酵装置处于封闭状态。

〖思考10〗在实际生产中，还要对发酵液进行煮沸处理，其目的是什么？

消灭发酵液中的杂菌。

3．3控制发酵条件

（1）发酵液装瓶后保持1/3的剩余空间。

（2）酒精发酵的温度要控制在18～25℃范围内，发酵时间控制在10～12天左右。

（3）醋酸发酵的温度要控制在30～35℃范围内，发酵时间控制在7～8天左右，并保持不断充气。

（学生分组讨论并完成思考11～12）

〖思考11〗在发酵液装瓶后问什么要保持1/3的剩余空间？

暂时存储发酵产生的co2，起到缓冲作用。

〖思考12〗在醋酸发酵过程中需要向发酵液中补充氧气，你认为最经济实用的方法是向发酵液中通入无菌空气。

4．结果分析与评价

4．1实验现象：

4．2检验：

酒精发酵后是否有究竟产生，可用重铬酸钾来检验。

（1）原理：在酸性条件下重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色。

【补充】为了控制和了解发酵进程，不断进行取样检查，其中检查的项目有原料浓度、产物浓度、发酵菌含量、溶氧量和ph等。

（2）方法：（填表，注意对照原则）

5、相关链接

为了提高果酒和果醋的产量和品质，抑制其他微生物的生长，还应直接向发酵液中加入人工培养的优良菌种。

（三）课堂总结、点评

本节课主要学习了以下几个问题：

1．果酒和果醋制作的原理

2．制作果酒和果醋的实验流程

3．实验操作中的注意事项

4．实验结果分析与评价

学生应当重点掌握果酒和果醋制作的原理，并且学会分析操作过程中注意的问题。通过小组讨论、联系生活来提高合作探究的能力，并且增强学习生物学的兴趣。

（四）实例探究

例1．生产果醋用的醋酸菌等细菌都具有的特征是（）

a．都是异养生物b．仅在有水条件下繁殖

c．仅在有氧条件下生长d．生存温度都超过80℃

解析：细菌的生长所必需的营养元素：碳源、氮源、无机盐、水生长因子，其中碳源、氮源、无机盐、生长因子因细菌种类的不同，所需的种类也不一样，而水是所有微生物生长共同所需要的物质。细菌按同化作用可分为自养型和异养型两种；按异化作用可分为需氧型和厌氧型。答案：b

例2．发酵过程中，不会直接引起ph变化的是

a．营养物质的消耗b．微生物呼出的co2

c．微生物细胞数目的增加d．次级代谢产物的积累

解析：微生物发酵过程中，微生物的代谢会消耗大量的营养物质，可能造成酸碱物质消耗不均，从而引起ph的变化；微生物的呼吸作用还会产生大量的co2引起ph的变化；同时产物的种类也能引起ph的变化。答案：c

☆综合应用

例3．在啤酒生产过程中，发酵是重要环节。生产过程大致如下：将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增多。当糖度下降到一定程度后，结束发酵。最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过程，回答以下问题：

（1）该过程表明啤酒酵母异化作用的特点是。

（2）初期，酵母菌迅速繁殖的主要方式是。

（3）酒精主要是啤酒酵母菌进行作用产生的代谢产物。

（4）经测定酵母菌消耗的糖中，98.5%形成了酒精和其它发酵产物。其余1.5%则用于。

（5）请写出由麦芽糖→葡萄糖→酒精的反应方程式。

解析：酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，在无氧条件下进行无氧呼吸，有氧时酵母菌能通过出芽生殖的方式大量繁殖，种群数量增加很快，无氧时能分解糖类产生酒精，释放出的能量，大部分储存在发酵产物中，极少数用于自身生长发育。

答案：（1）既能进行有氧呼吸又能进行无氧呼吸

（2）出芽生殖（3）无氧呼吸（4）自身的生长繁殖

（5）c12h22o11+h2o→2c6h12o6c6h12o6→2c2h5oh+2co2+能量酶酶

七、板书设计

八、教学反思

[资料]------葡萄酒的类别

葡萄酒若以颜色区分，可分为白酒、红酒和玫瑰红酒，但无论是红葡萄或白葡萄所压榨出来的果汁都是没有颜色的，所以白酒可以用红葡萄酿造，红酒是由于在酿造时连葡萄的皮一起发酵，吸收红葡萄皮所释放出来的色素而成为有颜色的红葡萄酒，如将红葡萄皮提早分开，让酒的颜色变淡，即成为玫瑰红酒。每家酒厂的玫瑰红酒由于葡萄皮与酒接触的时间长短不一，故颜色的深浅也不一致。白葡萄皮因没有色素效果，故酿造时并没有连皮一起发酵。

葡萄在成熟后便含有果糖、果酸，所谓酿造葡萄酒，简单来说，只是把葡萄压榨后的果汁，在发酵过程中将果糖转换成酒精，如果果糖全部转成酒精，则我们称这些为不甜或乾(dry)的酒，如在转换个程中，提前终止发酵，保留多一点糖份，便变成甜酒。

葡萄在发酵过程时，并同时产生热能和二氧化碳（汽泡），通常一般葡萄酒会让汽泡跑掉，但如把汽泡保存于葡萄酒中，便成为汽泡葡萄酒(sparklingwine)，香槟便是名闻世界之代表作（只有在法国香槟产区依规定酿制之汽泡酒，才能命名香槟，法国其它地区或世界各地之酿制，只能称作汽泡酒）。

课题2腐乳的制作

【教学三维目标】

（一）知识与技能：说明腐乳制作的原理

（二）过程与方法：注意实验流程的操作环节；动手实践，体验其中的变化

（三）情感、态度与价值观

微生物制剂的协议书模板(精)二

新的学期已经来临，为了保证新学期的工作正常和顺利进行，制定新学期的教学计划如下：

一、教学资料

本学期要完成七年级上册的全部资料。包括：

第一单元：认识生物（奇妙的声明现象、严整的生命结构、生物的生活环境）

第二单元：丰富多彩的生物世界（生物圈中的绿色植物、生物圈中的动物、生物圈中的微生物、生物的分类）

二、学生状况分析

本学期我担任初一1、2、3、4四个班的生物学教学任务。初一的孩子抽象思维潜力还比较弱，加之生物学又是一门新的课程，因此，教学中注意想办法激发学生对生物学的兴趣，调动学生学习的用心性，同时对学生严格要求，培养良好的学习态度和学习习惯。

三、教学理念

1、立足生物学基础知识、基本技能和思维方法，突出“理解人与自然和谐发展的好处”。

2、着眼于学生未来发展，培养学生的多种潜力，突出创新潜力培养。

3、强调科学性与人文性有机统一，客观讲述生物技术对人类生活、生产和社会可能产生的正负两方面影响。

4、注重理论联系实际，从生活实际引入科学，再回到现实生活，始终渗透sts精神。

5、落实《纲要》提出的具体课改目标，尊重学生的主体性，促进每一名学生的发展。

6、遵循教育规律，注重情感体验，培养学生用心主动的学习态度。

7、发挥学科优势，以科学的生理知识为基础，促进学生良好心理素质的养成。

四、教学工作策略措施

1、根据新课程标准的基本要求，认真研究教材和新课程的相关知识，将新课程理念融会于日常教学活动中，在传授知识的同时使同学们能在简单愉悦的环境中学习知识、培养潜力和锻炼自己。

2、研究每个知识点，根据课程标准所规定的教学层次，严格控制深度和广度，掌握每个重点和难点，采用现代化的教学手段和教学模式，提高学生对知识的理解速度和潜力。

3、加强备课的环节和资料设计，既要启发和引导学生对知识实现自主学习，体现学生学习的自觉主动性，又要发挥教师的指导作用，在教学过程中体现师生互动的教学新境界。

4、用心参加学校和各级组织的学习进修机会，从各个方面充实自己，使自己的知识水平在已有的基础上更上一层楼，同时也能够增长见识，在以后的教学活动中能够取他人之长补自己之短，使自己的教学水平能有较大的进步，对学生水平的提高也有很大的影响。

5、用心向其他优秀教师请教，既包括知识方面也包含教学方法和技巧，更重要的是学习他们的先进的教学经验，并加以优化利用从本质上提高教学水平，使教学成绩有较大的提高。

6、充分利用我校现有的实验和现代化教学仪器和教学设施，使同学们体会到科学的不断发展给我们带来的便利，促进他们学习科学文化知识的信息和毅力。

7、汇总所学知识，使知识系统化、全面化和规范化，对学生进行理论联系实际的教育，进行生物与生活相关知识的联系练习，提高学生的综合应用潜力。

五、教学进度：略

微生物制剂的协议书模板(精)三

（1）了解培养基的配置原理和方法，掌握分离培养微生物的有关准备工作。

（2）掌握高压灭菌方法及原理

（1）培养基的制备原理：

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

从营养角度分析：

营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等；?适宜的酸碱度(ph值)和一定缓冲能力；?一定的氧化还原电位；?合适的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反复融化，其凝固性降低。

（2）湿热灭菌原理－高压蒸汽灭菌

在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温

度也随之增加。在0.1mpa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

实验材料与方法

配制培养基所需器材

实验设备：高压蒸汽灭菌器。

实验器材：500ml三角烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、

称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐、平皿、剪刀等。

培养基等集中放讲台前高压桶内，送到洗刷室统一高压灭菌条件及注意事项

高压灭菌条件：121.3℃，15min。含糖培养基113℃，15min。

倒平板电炉加热灭菌好的培养基打开平皿包装倒平板（10块）注意事项：空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）。

a.在酒精灯火焰处，倾斜打开瓶口。

b.瓶口要过火焰。

c.左手掀开平皿小口。

d.倾注满皿底再多一点，约10ml（7cm直径平皿）。

e.推放一边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。

f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4℃备用。

（1）如何证明培养基灭菌是否彻底?

把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好；如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落，可能是摆放的太紧，导致蒸汽不畅，或锅的结构不合理等原因所致，应根据上述情况进行改进；如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，应提高压力或延长灭菌时间。经过几次检验都证明能彻底灭菌后，以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。

经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。

（2）为什么说消毒与灭菌是微生物学和临床医学必不可少的基本知识?由于病原生物广泛存在于自然界，可通过不同途径和媒介进入人体，引起感染或造成疾病流行。因此，杀灭或清除存在于体外传播媒介上的病原生物，对于切断传播途径、预防和控制其感染具有重要意义。自古以来，人们就利用煮沸、火烧、日晒等方法杀灭或去除微生物，达到预防疾病的目的。实际上，除了在临床医疗实践中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物学实验室、食物保存、饮水净化、药品与生物制品生产等过程中都需要避免微生物的污染。

接种是微生物实验及科学研究中一项基本操作技术。根据实验目的和要求，

选择合适的接种工具与接种方法，接种工具有接种环、接种针、接种铲、接种钩、吸管、滴管、棉签等。常用接种方法有：斜面接种，液体接种，穿刺接种，平板接种和固体接种。接种的关键是无菌操作。

无菌操作的原则：在酒精灯火焰旁进行，所有器皿均须严格消毒，培养基应事先做无菌试验，

接种工具使用前后须经火焰烧灼灭菌，棉塞不能乱放，始终夹在手指中。在培养四大类微生物时应注意选择适宜的培养条件。多数细菌为专性需氧菌与兼性需氧菌，少数为厌氧菌。多数食品腐败菌和工业用菌种，以及人和动物病原菌的最适生长温度为37℃，并且在近中性（ph6.5～7.5）条件下生长良好。多数放线菌为好氧菌，少数为厌氧菌，最适生长温度为28～30℃，多数适宜在偏碱性环境中生长（ph7.5～8.5）。

（1）实验材料：实验设备：温箱。

实验器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假丝酵母、新生隐球酵母菌、细黄链霉菌、pda平板、高盐察氏平板、高氏合成i号平板、塑料筐、20%甘油水溶液、镊子、接种铲、无菌盖玻片、无菌滤纸、无菌载玻片、石棉网、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐等。

（2）实验方法：平板接种：毛霉→pda平板（点植法）

啤酒酵母→pda平板（五区分离划线法）青霉、曲霉→pda平板（连续划线法）

1、取灭菌后小室平皿。

2、取无菌pda琼脂薄层平板，用镊子夹住盖玻片切割成0.5～1.0cm2的琼脂块，并将其移至培养小室中的载玻片上，制作过程注意无菌。

3、用接种环取少量霉菌的孢子接种于培养基四周，用无菌镊子

将盖玻片覆盖在琼脂块上，并(转载于:l灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，标记，置28～30℃培养3～5d

1.取粮食样品20g,放入无菌烧杯，加无菌水洗涤，

反复10次，弃去水后，将粮粒倒于平皿内备用2.镊子取粮食种入pda琼脂内，每皿可接种5-10粒。

放线菌的接种：取细黄链霉菌划线法接种，在接种的划线处，无

菌操作斜插入盖玻片数张。

1.空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）

2.在酒精灯火焰处，倾斜打开瓶口。

3.接种环使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可。

4.接种环使用后，先在火焰周围把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。5.金属杆快速通过火焰2－3次，杀灭表面微生物

1、粮食中产毒真菌的种类及产生毒素？

青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、细黄链霉菌（放线菌）青霉素、丝生毛霉素、黄曲霉素、根霉素、白念菌素。细黄链菌素

2、常用霉菌培养基有哪些？

马铃薯蔗糖培养基

豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基察氏培养基

3、霉菌的接种方法有何不同？为什么？

（1）连续划线法（青霉、曲霉）

青霉与曲霉为局限性生长的霉菌。应采用连续划线接种法接种。（2）点植法（根霉、毛霉）

根霉与毛霉生长区域比较大，应采用点植法。（3）小室载玻片培养法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）

实验三霉菌的制片与形态观察

实验目的：学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；

了解四类常见霉菌的基本形态特征。了解放线菌的基本形态特征。

实验原理：霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为3-10μm）,常是细

菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液，用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易干燥，能保持较长时间，能防止孢子四处飞散，棉兰具有一定的染色作用，染液的蓝色能增大反差。

（一）菌种：在马铃薯琼脂平板上培养3—4天的青霉(penicilliumsp.)、曲霉(aspergillussp.)、毛霉（mucorsp.）、根霉；

（二）器材及用具：镊子、载玻片、盖玻片、显微镜。

（一）直接制片观察

于洁净载玻片上，用镊子取霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝，然后小心地盖上盖玻

片。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜（二）小室培养观察

将载玻片直接放低倍镜下观察，再换高倍镜观察。

观察原则：

毛霉：用低倍镜观察孢子囊梗、囊轴等。用高倍镜观察孢子囊孢子的形

状、大小。

根霉：菌丝、孢子同毛霉，注意观察有无假根。

曲霉：在高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子着生位置，辨认分生孢

子梗、顶囊、小梗和分生孢子。

青霉：在高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生

孢子的形状等。实验结果：

分析与讨论：

青霉和曲霉的形态有哪些异同？

青霉常分布在霉腐变质的水果、蔬菜、粮食和皮革等物体上，菌体直立菌丝的顶端长有扫帚状的结构，结构的每一个分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青绿色，进行孢子生殖。

曲霉广泛分布在谷物、空气和土壤中，曲霉直立菌丝的顶端膨大成球状，球状结构的表面放射状地生有成串的孢子，孢子随曲霉种类的不同而呈黄色、橙色或黑色。

从皮肤取材查真菌如何检查？

微生物制剂的协议书模板(精)四

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：xxx学号：2011001400xx年级：20xx级生物基地班 实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组 同组者：xx

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。

微生物制剂的协议书模板(精)五

一、指导思想

以党的教育方针，科学的教育理论为指导，以全面提高学生的科学素养为宗旨，以生物课程标准为依据，以培养学生的创新精神和实践能力为重点，在继承我国现行生物教学优势的基础上，力求更加关注学生已有的生活经验;更加强调学生的主动学习，增加实践环节，使每一个学生通过学习生物，能够对生物学知识有更深刻的理解，能够对今后的学习方向有更多的思考;能够在探究能力、学习能力和解决问题能力方面有更多的发展;能够在责任感、合作精神和创新意识等方面得到提高。为学生们参加社会主义现代化建设，适应社会和继续学习，打下必要的基础。

二、学情分析

本学期我担任八年级4班，5班的生物教学。这几个班的学生整体素质较好，有一定的学习氛围。大部分学生能完成老师布置的任务和各项基本要求，但不够积极主动;少部分学生缺乏学习兴趣，学习不自觉，自我约束能力较差，学习成绩有待提高。

三、教学任务

本学期讲授义务教育课程标准实验教材——《生物学》(八年级下册)。

四、教材分析

本学期教材内容包括生物圈中的其他生物和生物的多样性及其保护两个单元。生物圈中的其他生物这一单元从生物圈的角度简要介绍了各种动物的类群。编排上打破传统学科体系完整性，没有从进化的角度依次介绍各门类的动物的特征，而是以重点动物为例(如鱼、家兔、昆虫和鸟等)来探究动物在形态、结构与生理功能上与其环境相适应的特点以及各门动物的基本特征，同时突出了动物与环境的关系这一主题思想。这样编写符合学生的认知规律，同时利用一系列图片和探究活动来介绍有关的动物知识，让学生在做中学，激发了学生的学习兴趣，从而避免了单纯的叙述枯燥的知识引起学生的反感。生物的多样性及其保护这一单元教材中并未全面而系统地介绍生物分类的方法，而是通过活动让学生体验生物的分类是根据不同生物的特征上的相似程度来进行的，并以马为例介绍了从种到界的分类等级和分类的基本单位，进而认识生物的多样性，并理解每种生物都有存在的价值，形成保护生物的多样性就是保护人类自己的情感。

本学期共有探究活动41个，其突出的特点有：

1、加强了学生探究活动的自主性和选择性，如“鳍在游泳中的作用”、“鸟适于飞行的特点”、“菜青虫的取食行为”等探究活动均需要学生自主进行设计实验方案等，教材只是作了重点提示，旨在给学生留有充分的思维空间，由学生独立完成。

2、探究活动的内容及选材与学生的生活实践紧密相联系，有利于对学生实践能力的培养，如“饲养和观察蚯蚓”、“调查动物在人们生活中的作用”、“制作甜酒”、“分析生物多样性锐减的资料”等活动内容，同时这些探究活动还有利于激发学生的学习兴趣。

3、加大了技能训练的难度。本学期的“技能训练”内容增加了“综合和概括”、“设计和评价实验方案”等训练项目，同时还进一步地加强了学生搜集和处理信息的能力，有利于培养学生的多种能力。

4、注重科学方法的教育，在内容上不仅包含科学探究的一般方法，还增设了微生物培养的方法、模拟实验的方法等。

五、教育教学目标

1、认识动物都有与各自环境和生活习性相适应的形态结构特点;理解动物的运动依赖于一定的结构基础;

2、通过分析动物的行为，区别动物的先天性行为和学习行为，并且理解动物的先天性行为是由遗传基础决定的，而动物的学习行为是在生活过程中逐渐获得的。

3、通过了解细菌和真菌相似的营养方式，不同的结构和繁殖方式，从而认识细菌和真菌的特征。

4、通过观察、调查、收集、实验、模拟等方法，体验科学探究活动，在活动中提高学生的动手操作能力，发展学生的创新能力和实践能力;通过讨论和开放性练习题培养学生发散思维的能力;形成爱护动物的情感，提高保护动物栖息环境的意识，学会用辩证的观点看待动物、细菌和真菌在自然界的作用以及与人类的关系，建立生物与环境和谐统一的观点;认识生物科学与技术对人类生活和社会发展的作用。

5、通过认识生物的多样性，并理解每种生物都有存在的价值，形成保护生物的多样性就是保护人类自己的情感。

六、优生、潜能生培养

加强对优生和潜能生的基础知识教学，对他们因材施教，加强个别辅导，培养其学习兴趣，让他们学会学习生物的方法。

优生辅导措施：

1、指导学生阅读一些课外资料，试写一些生物小论文;

2、指导学生多参与社会实践，增强理论联系实际的能力和解决问题的能力;

3、培养其多方面兴趣和创新精神。

4、多提供一些探究性、开放性的题目，训练学生的思维能力;

5、课外辅导，培养他们的搜集信息与处理信息能力。

潜能生辅导措施：

1、严格要求认真做好每次练习，

2、根据不同的情况设计不同层次的问题，给他们创造成功机会;

3、鼓励互帮互学，合作学习，优生带潜能生，实行”一帮一活动”;

4、随时关注他们的言行变化，及时发现问题，批评或鼓励，增强其学习信心。

5、进行学法指导。

七、减负提质教学措施

1、严格按规定时间授课，不拖堂，不占课;

2、不乱订乱发课外资料;

3、不补课，以免增强学生的课业负担;

4、精讲精练，注重培养学生的各种能力。

5、减轻学生的作业负担，严格控制作业量。

6、分层次布置作业，因材施教。

八、学科教研教改计划安排

1、深入新课改，注重培养学生创新精神，提高学生的的各种能力;

2、创新课堂教学模式，充分展示学生的才能;

3、改进教学手段和创新教学方法，增强学生的学习兴趣，充分利用现代教育教学手段，提高教学效果;

4、多开展研究性学习，发展学生的能力，培养学生的创造性思维能力;

5、提高学生的合作、探究能力，充分发挥学生的主体作用;

6、适当开展一些有关的课外活动，增强学生对生物学的兴趣。