微生物与人体健康论文 微生物与人体健康论文范文(五篇)

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有关微生物与人体健康论文一

（1）了解培养基的配置原理和方法，掌握分离培养微生物的有关准备工作。

（2）掌握高压灭菌方法及原理

（1）培养基的制备原理：

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

从营养角度分析：

营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等；?适宜的酸碱度(ph值)和一定缓冲能力；?一定的氧化还原电位；?合适的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反复融化，其凝固性降低。

（2）湿热灭菌原理－高压蒸汽灭菌

在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温

度也随之增加。在0.1mpa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

实验材料与方法

配制培养基所需器材

实验设备：高压蒸汽灭菌器。

实验器材：500ml三角烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、

称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐、平皿、剪刀等。

培养基等集中放讲台前高压桶内，送到洗刷室统一高压灭菌条件及注意事项

高压灭菌条件：121.3℃，15min。含糖培养基113℃，15min。

倒平板电炉加热灭菌好的培养基打开平皿包装倒平板（10块）注意事项：空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）。

a.在酒精灯火焰处，倾斜打开瓶口。

b.瓶口要过火焰。

c.左手掀开平皿小口。

d.倾注满皿底再多一点，约10ml（7cm直径平皿）。

e.推放一边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。

f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4℃备用。

（1）如何证明培养基灭菌是否彻底?

把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好；如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落，可能是摆放的太紧，导致蒸汽不畅，或锅的结构不合理等原因所致，应根据上述情况进行改进；如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，应提高压力或延长灭菌时间。经过几次检验都证明能彻底灭菌后，以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。

经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。

（2）为什么说消毒与灭菌是微生物学和临床医学必不可少的基本知识?由于病原生物广泛存在于自然界，可通过不同途径和媒介进入人体，引起感染或造成疾病流行。因此，杀灭或清除存在于体外传播媒介上的病原生物，对于切断传播途径、预防和控制其感染具有重要意义。自古以来，人们就利用煮沸、火烧、日晒等方法杀灭或去除微生物，达到预防疾病的目的。实际上，除了在临床医疗实践中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物学实验室、食物保存、饮水净化、药品与生物制品生产等过程中都需要避免微生物的污染。

接种是微生物实验及科学研究中一项基本操作技术。根据实验目的和要求，

选择合适的接种工具与接种方法，接种工具有接种环、接种针、接种铲、接种钩、吸管、滴管、棉签等。常用接种方法有：斜面接种，液体接种，穿刺接种，平板接种和固体接种。接种的关键是无菌操作。

无菌操作的原则：在酒精灯火焰旁进行，所有器皿均须严格消毒，培养基应事先做无菌试验，

接种工具使用前后须经火焰烧灼灭菌，棉塞不能乱放，始终夹在手指中。在培养四大类微生物时应注意选择适宜的培养条件。多数细菌为专性需氧菌与兼性需氧菌，少数为厌氧菌。多数食品腐败菌和工业用菌种，以及人和动物病原菌的最适生长温度为37℃，并且在近中性（ph6.5～7.5）条件下生长良好。多数放线菌为好氧菌，少数为厌氧菌，最适生长温度为28～30℃，多数适宜在偏碱性环境中生长（ph7.5～8.5）。

（1）实验材料：实验设备：温箱。

实验器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假丝酵母、新生隐球酵母菌、细黄链霉菌、pda平板、高盐察氏平板、高氏合成i号平板、塑料筐、20%甘油水溶液、镊子、接种铲、无菌盖玻片、无菌滤纸、无菌载玻片、石棉网、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐等。

（2）实验方法：平板接种：毛霉→pda平板（点植法）

啤酒酵母→pda平板（五区分离划线法）青霉、曲霉→pda平板（连续划线法）

1、取灭菌后小室平皿。

2、取无菌pda琼脂薄层平板，用镊子夹住盖玻片切割成0.5～1.0cm2的琼脂块，并将其移至培养小室中的载玻片上，制作过程注意无菌。

3、用接种环取少量霉菌的`孢子接种于培养基四周，用无菌镊子

将盖玻片覆盖在琼脂块上，并(转载于:l灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，标记，置28～30℃培养3～5d

1.取粮食样品20g,放入无菌烧杯，加无菌水洗涤，

反复10次，弃去水后，将粮粒倒于平皿内备用2.镊子取粮食种入pda琼脂内，每皿可接种5-10粒。

放线菌的接种：取细黄链霉菌划线法接种，在接种的划线处，无

菌操作斜插入盖玻片数张。

1.空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）

2.在酒精灯火焰处，倾斜打开瓶口。

3.接种环使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可。

4.接种环使用后，先在火焰周围把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。5.金属杆快速通过火焰2－3次，杀灭表面微生物

1、粮食中产毒真菌的种类及产生毒素？

青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、细黄链霉菌（放线菌）青霉素、丝生毛霉素、黄曲霉素、根霉素、白念菌素。细黄链菌素

2、常用霉菌培养基有哪些？

马铃薯蔗糖培养基

豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基察氏培养基

3、霉菌的接种方法有何不同？为什么？

（1）连续划线法（青霉、曲霉）

青霉与曲霉为局限性生长的霉菌。应采用连续划线接种法接种。（2）点植法（根霉、毛霉）

根霉与毛霉生长区域比较大，应采用点植法。（3）小室载玻片培养法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）

实验三霉菌的制片与形态观察

实验目的：学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；

了解四类常见霉菌的基本形态特征。了解放线菌的基本形态特征。

实验原理：霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为3-10μm）,常是细

菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液，用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易干燥，能保持较长时间，能防止孢子四处飞散，棉兰具有一定的染色作用，染液的蓝色能增大反差。

（一）菌种：在马铃薯琼脂平板上培养3—4天的青霉(penicilliumsp.)、曲霉(aspergillussp.)、毛霉（mucorsp.）、根霉；

（二）器材及用具：镊子、载玻片、盖玻片、显微镜。

（一）直接制片观察

于洁净载玻片上，用镊子取霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝，然后小心地盖上盖玻

片。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜（二）小室培养观察

将载玻片直接放低倍镜下观察，再换高倍镜观察。

观察原则：

毛霉：用低倍镜观察孢子囊梗、囊轴等。用高倍镜观察孢子囊孢子的形

状、大小。

根霉：菌丝、孢子同毛霉，注意观察有无假根。

曲霉：在高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子着生位置，辨认分生孢

子梗、顶囊、小梗和分生孢子。

青霉：在高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生

孢子的形状等。实验结果：

分析与讨论：

青霉和曲霉的形态有哪些异同？

青霉常分布在霉腐变质的水果、蔬菜、粮食和皮革等物体上，菌体直立菌丝的顶端长有扫帚状的结构，结构的每一个分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青绿色，进行孢子生殖。

曲霉广泛分布在谷物、空气和土壤中，曲霉直立菌丝的顶端膨大成球状，球状结构的表面放射状地生有成串的孢子，孢子随曲霉种类的不同而呈黄色、橙色或黑色。

从皮肤取材查真菌如何检查？

有关微生物与人体健康论文二

为加强医院病原微生物实验室生物安全管理工作，确保医院平安目标的实现，我院检验科根据xxxx省《病原微生物实验室生物安全管理条例》的相关内容，对医院实验室安全管理工作进行了自查，对涉及病原微生物菌（毒）种及样本的人员进行了培训，提高他们生物安全的意识，掌握必要的生物安全知识。

医院检验科根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》的相关规定进行学习，并定期对有关生物安全各项规章制度的运行情况进行检查，对存在的问题及时进行整改。实验室所从事的实验活动均严格遵守有关的国家标准和实验室技术规范、操作规程，并指定专人监督检查实验室技术规范和操作规程的落实情况。同时，对检查情况进行详细记录，定期召开会议讨论工作中发现的问题，及时纠正。

因各方面条件限制我院现不能开展病原微生物实验室生物的检查，根据通知要求积极组织相关人员主要学习了：病原微生物实验室菌（毒）种的管理严格登记制度，收到菌（毒）种后立即进行编号登记，详细记录菌（毒）种的名称、来源、特性、用途、批号、传代日期、数量。在菌（毒）种的管理，安全保卫制度，安全保卫措施，保管过程中，传代、分发及使用，均应及时登记，定期核对库存数量。菌（毒）种在进行销毁时，灭菌指示标志，灭菌效果，同时做好销毁登记等内容。

在此次自检中，我院实验室对以前制订的处置意外事件的应急指挥和处置体系，进一步进行了修订，使之能满足实际工作的需要。

针对当发生自然灾害（如地震、水灾等）或设施出现故障时，我们制定了可能遇到的紧急情况及其处理原则。

同时规范了菌（毒）种外溢在台面、地面和其他表面的的处理原则、皮肤刺伤（破损）的处理原则、离心管发生破裂的处理原则并建立了意外事故报告制度。

在实验室的显著位置张贴了实验负责人、实验室工作人员、消防、医院、公安、工程技术人员、水、电气维修部门电话。

组织检验人员对《病原微生物实验室生物安全管理条例》进行全面系统的学习，同时加强了实验室的准入制度的管理，标明实验室类型、负责人及其联络方式。加强了个人安全防护，并要求检验人员严格遵守标准的操作规程进行检验。

通过这次对微生物实验室生物安全管理工作自查，提高了全体检验人员对微生物实验室生物安全管理工作重要性的认识，加强管理，采取有效措施，确保实验室工作安全。

有关微生物与人体健康论文三

生物技术专业是一个资料广泛、综合交叉各个学科而成的一项学科。新时期大学中生物技术专业对于我们的日常生活和工作中的重要意义可谓是不言而喻、有目共睹。生物技术将生物产品进行深入剖析和研究，从生物体不一样层次上发挥生物产品的功能，极大地提高了生物产品的内在价值，为人类的物质生活提高了更加高质量的产品。例如，我们生活中的保健食品、生物抗癌药品、转基因产品等为我们的日常生活带来了很多帮忙和方便，提高了生活质量。对于大学的生物技术专业来说，它涉及的范围很广，需要我们掌握的知识也有很多。生物技术专业不仅仅有效包括了细胞生物学、普通生物学、基因工程、生态学、分子生物学、微生物学等多种方面，这些方面与我们的生活可谓是息息相关，需要我们进行进一步的分析探讨。生物技术专业的研究现状具体如下。

在当今年代，生物技术专业热潮席卷全球，它的内在价值被广泛认知，已成为21世纪自然科学的前沿学科。在近几十年，世界格局发生了重大的变化，生命科学异军突起迅速发展。在基因工程、细胞等一系列探索成为我们学校发展的主要线索和主要方向的时候，需要更多的生物技术专业人员投入到科研项目当中。生物技术所创造的价值已经远远超过人们的想象，每一个新的发现和技术革新，都将带动大规模的产业变革，所以，社会急需很多的优质高层次生物技术人才，以持续推动社会生产力的不断提高和发展。同时，生物技术专业发展也面临着许多新的挑战。然而，目前生物技术专业高层次、综合型科研人才仍然稀少，许多科研成果距离生产实践还有很长的距离，这也就需要生物技术专业培养更多的应用型人才。总之，生物技术的飞速发展为生物技术专业的发展带来了巨大的生机。所以，大学的生物专业人才具有极为广阔的发展前景和应用价值。

虽然，生物技术专业前景极为广阔，给我们日常生活带来许多好处，然而，许多高校对生物专业的深入研究仍然不够透彻、明晰，仍然有许多问题有待于我们去解决。在生物技术课程设计中仍存在不足，许多课程和教材没有进行知识更新，无法跟上时代快速发展的步伐。课程的整体框架仍停留在20年以前的状态，创新性课程少，实用性课程也少。实验课程虽然基本满足学生的需要，但留给学生独立运作的机会还很少，束缚了学生的创新意识和思想等。同时，学生普遍的感觉是专业知识陈旧，资料缺乏与时代相对应的新颖性和先进性。并且，生物技术所涉及的具体资料、应用以及生活实际的一些具体方案与我们的期望值和预期值仍然有着较大的差距，需要我们进行进一步的分析、研究、讨论。

既然大学生物技术专业与我们的生活息息相关，现根据我个人的一些观点，对生物技术专业的发展趋势进行简单的解析。

1.生物技术专业的市场导向。生物技术专业的重要现实意义是不容否认的，这就决定了生物技术在现代社会的发展趋势。从基础科学方面，它能够有效地帮忙人们清晰的感受到自然生命和生物的存在，加深人们的理解。在人们的日常生活中，生物技术能有效地帮忙人们治疗一些疾病，方便人们的生活，例如器官移植等先进的技术的有效推广给人们生活带来了不可思议的惊人的好处，这就是生物技术的魅力所在。再如，人们研究的抗倒伏、抗旱等新的'品种，不仅仅有效提高了人们的生活质量，更有效地减轻了人们的负担。毕竟，生物技术存在并能够得到广泛推广的根本原因在于它能够为人类造福。生物技术与工程学科专业的区别在于不仅仅应用于工厂生产，并且在于生物本身的潜力开放，从基础的营养价值到功能性活性成分分析，再到食用或药用价值开发，日新月异的新技术不断涌现，为生物技术专业发展带来了新的机遇和挑战。这就需要不断学习和认识现代生物技术发展的动向和潮流，加快脚步跟上甚至超越前沿，才能获取主动，从而构成主动性市场导向而不是被动顺从。综上所述，大学高校中的生物技术专业的发展方向是经过进一步的科学研究，给人们的生活水平带来质的飞跃，这也是高校生物学专业设置教学目标和教学资料的重要方向。

2.生物技术专业的就业方向。随着生物技术的逐步普及，人们的生活也越来越离不开生物技术专业方面的人才，所以，这就为生物技术专业的高校学生供给了优越的就业机会和发展前景。随着社会生产力的不断发展提高，对生物技术行业的需求，国家从宏观层面上更加重视高等学校生物技术的专业水平，要求不断提高，对专业教学自然要有更高的要求，将有更多的高校开设此专业，对专业教育工作者的需求自然会增加。从事专业教学工作，不仅仅需要扎实的专业知识、技能，也要有本事应付这个瞬息万变的社会。同时在就业方向上，大城市与小城市、经济发展迅速地方和经济发展缓慢的地方相比，有着巨大的区别，对于生物技术专业人才来说，地区性差异造成的发展空间差异是必然的。先进性技术的发展是以经济实力和实际需求程度为基础。据统计数据显示，此刻就业的生物技术的毕业生，超过80%的人选择到北京、上海和各大省会城市工作，认为留在大城市对本专业及个人以后的发展都能供给更多的机会。生物技术专业学生的就业目前主要在自主择业、公务员和考取硕士研究生等三个方向，这也是学生本人的意愿。有的学生已经厌倦了大学生活，急于进入社会工作，以期锻炼自我，实现自我价值；有的学生采取稳妥的方式，考取公务员、村官或教师等途经，实现就业。但不管从哪个方向迈出就业这一步，都需要付出艰辛的劳动和努力，这也是所有生物技术专业学生所面临的问题，由于缺乏社会经验，导致就业后跳槽频繁，甚至灰心丧气。所以，应对这样的生存挑战，仅有从主观上加深学生的专业技术技能和人际社会经验，从客观上耐心寻机，才会寻求到新的发展机会。

生物技术专业具有良好的发展前景，它与信息科学等专业同样具有发展迅猛、日新月异的特性。对于生物技术专业的大学生，机遇与挑战并存，生物技术专业着重培养具备丰富实践经验、掌握扎实的基本知识、遇事有分析问题、解决问题的本事的综合素质的人才，谁能够真正掌握先进的科学知识和科研技能，谁就将领导生物技术的导向。正所谓，术业有专攻，人们对于生物技术专业的人才要求是十分严格的，这就需要学生在大学期间积累很多的知识和经验，经过量的积累，从而到达质的飞跃。在就业中的方向选择将一向是生物技术专业人才需要研究的根本性问题，这也就需要学生在进入大学之初，就能够规划好自我未来发展之路，这样才能成为最终的成功者。所以，这就需要学生具有全力以赴的精神和毅力，为生物学更好的造福人类做出自我的贡献。

有关微生物与人体健康论文四

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：xxx学号：2011001400xx年级：20xx级生物基地班 实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组 同组者：xx

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。

有关微生物与人体健康论文五

1.基本概念、基本原理和基本观点仍是复习重点

高考最鲜明的特点是基础性。基础知识是高考的第一依据，高考命题所涉及的知识多是被理性抽象化了的知识在考题中借一定的情景出现，要求考生用生物学概念、原理、规律等做出说明，基础不扎实是考生失分的第一原因。所以在学习中要做到能清楚地复述基本概念、基本原理和基本观点;能对重点的概念、原理和观点进行分解和综合;能梳理教材的知识体系，揭示重点知识之间的内在联系;能比较、分析同类型知识的差异之处;能运用所学知识分析、解决实际问题。

从20xx年的试题可以看出，高考对基础知识的考查并没有弱化，而是要求更高了，高考不再是考查知识的再现，而是考查能否灵活运用所学知识分析和解决具有综合性质的实际问题。这就要求学生在学法上要以课本为本，充分发挥课本的主导作用，弄清每个章节的知识点和要求，基本规律的来龙去脉以及本章节内容和前章节内容的关联。不仅要加深对基本概念、基本规律的理解与运用，而且还要弄清概念、规律的形成过程。完整地复习基础知识，使用一些学习策略，如画概念图、框架图等构建生物学科的知识体系，不能留存知识盲点。

2.复习突出重点，加强考点的前后联系

主干知识内容不仅是学习的重点，也是高考试题中出现频率较高的考点内容。如细胞的结构与功能、有丝分裂、减数分裂、光合作用、呼吸作用、细胞内的物质代谢、生命活动的调节、遗传的基本定律、伴性遗传、基因突变、染色体变异、生态系统的结构与功能、环境保护、基因工程、免疫、细胞工程等等。对这些主干知识内容的理解要有一定的深度和广度，才能以此去分析和解决新情景的问题。要力求做到知识点、能力点、薄弱点、应用点和考查点心中有数，那种不分主次泛泛复习以及题海泛滥，无疑都是有害的。概括起来高中生物的主干知识有以下方面的内容：

在生命的物质基础和生物体的结构基础方面，重点考查蛋白质和核酸、细胞增殖过程中的染色体的变化规律等;特异性免疫和免疫失调引起的疾病等内容;

在生物的新陈代谢方面，重点考查酶、光合作用和呼吸作用、三大类物质的代谢及微生物的代谢特点等内容;

在生命活动的调节和免疫方面，重点考查激素调节及与生活相关的免疫知识;

在遗传和进化方面，重点考查从基因水平上分析遗传学问题以及遗传育种和遗传系谱;

在生物与环境方面，重点考查应用生态学观点方法分析问题和解决问题的能力。

3.重视实验能力的提高

生物都是以实验为基础的自然科学，它的许多知识来源于对实验结果的分析、归纳和总结。对实验能力的考查是当前高考的重要内容之一。对于每一个实验，必须认真弄懂实验目的、原理，熟悉实验器材，掌握实验方法和步骤，既要重视实验结果，更应该重视对结果的分析，学会探究和推论;能正确处理数据，对结果整理与计算，得出正确结论，能处理非预期现象。

同时还要熟悉实验设计的基本方法和技巧，从而培养自己的实验能力和创新精神，适应高考试题的变化。因此要注重挖掘教材潜在的实验与探究因素，自然科学的知识是在观察、实验的基础上得出或通过实验得到实证的，复习时要多从实验角度想一想，这一结论是怎么得出的?我们有没有办法进行验证与探究?加强实验的基本思想、方法以及实验题的解题技能、技巧的形成训练。要掌握实验与探究的基本方法以及解答实验类试题的基本技能。

4.复习的广度比深度更重要

从近几年的高考可以看出，今后的命题可能会无所谓传统的重点、热点、冷点之分，因此要善于构建知识的体系与网络，彼此融会贯通，并注意查漏补缺，由“深挖洞”教学向“广积粮”教学转轨，知识的广度应该得到充分展现，要培养学生能读懂自然科学方面资料的能力，能看懂图表所包含的信息，并能从中找出规律，具备基本的自然科学知识以及判断、推理和计算能力。阅读生物学方面的资料时，要能读懂模式图、示意图和图解。

5.知识的综合应用是关键

学习生物基础知识仅仅停留在理解上是不够的，还要能在理解的基础上，应用这些知识指导自然科学的研究、社会的生产和人类的生活。要求准确把握、理解生物学知识，形成知识的迁移能力，解决生产、生活中实际问题，重点在于：

①用自然科学的基本知识解释和说明人类生活和社会发展中遇到的问题;

②了解自然科学知识在人类生活和社会发展中的应用;③能够运用自然科学的知识对有关见解、实验方案、过程和结果进行评价。

6.突出图文信息转换与分析能力的培养

高考中以图像、图表和数据的信息出题是最为重要的考查手段。能够阅读这类资料并初步运用这种资料形式，把握事物的特征、规则或关系，体现了收集和处理信息的能力、获得新知识的能力、分析和解决实际问题的能力。生物体内的生理过程，往往随着时间、外界条件的变化而发生有规律的变化。

这些规律往往通过曲线的形式表达出来，以曲线、图表为载体，可考查学生将图表转换成文字表达，或把文字转换成图表表达，甚至图表间的转换能力。这类试题能够考查学生的识图能力、判断能力和分析表达等多种能力，而且有较好的区分度，因此将会是新教材背景下高考命题的热点和重点。因此复习中应注意从情境中获得信息。平时要加强识读图表能力的训练，善于从图、表提供数据的处理过程中获取信息，理解题意，作出正确判断。

7.科学作答不可忽视

规范化答题时考场上减少失分，获取高分的重要法宝。首先，在保证答题方向正确时，一定要认真审题，逐字逐句看清楚，提取一切有效信息，挖掘一切隐含条件，排除干扰信息和迷惑条件，从容答题。答案要准确，要做到条理清楚、逻辑严谨;简洁明了，答案要尽量使用规范化的学科语言。平时要做到错题分析订正要到位，复习中要有一个错题本，监督自己把握重点，消除盲点，加强弱点，切实做好纠错。生物试题很多，无论如何也做不完。

因此要归类做有代表性的试题，一般情况下第一次做对的题，以后不会做错，第一次做错的题，以后做错的可能性较大，因此要有一个错题本，对作业、考试中出现的差错，及时反思，及时纠正;对事故易发地带有意识地加以强化训练。每一次练习或考试后，要对差错做出详尽的分析，找出错误原因。这同时为考前的复习积累了重要的有针对性的资料。

细节决定成败。高考解题不规范是造成考生非智力因素失分的一个主要原因。尤其是实行网上阅卷后，对规范解题提出了更高的要求。比如对字体潦草的卷面直接评卷和扫描到计算机中再评卷，可视效果就不一样，后者会更差。所以解题要做到“四化”，即段落化、序号化、要点化、提示化。答案要力求具有准确性、科学性、完整性、简洁性。最后，结果一定要写在醒目的位置。

8.心态很重要

高考二轮复习时决定高考的关键，不仅是因为它是知识方法综合的关键，也是学生心理的关键期。临近高考，考生最容易出现急躁情绪。许多考生的放弃都是从第二轮复习开始的，原因主要是各科进行二轮复习的内容跨度大，综合性高，部分学生有些吃力，另外随着高考的临近，学生的心理压力比较大，所以在第二轮复习中，不仅要重视知识方法能力的培养，更要重视良好的心理素质的培养。

“学会”永无止境，“会学”更为关键。我们在二轮复习的过程中，应针对自身的实际情况，找准“分数增长点”，消化掌握已有的知识，把漏洞补齐，把薄弱的环节夯实，把该记的东西记牢，相信成绩会有很大的提高。

心存高远，保持一种平静而有激情的心态，加上矢志不渝的努力，成功就会向你绽开灿烂的笑容。

【高考生物复习计划二】