高压实验心得体会和方法 特高压实训心得体会(六篇)

我们得到了一些心得体会以后，应该马上记录下来，写一篇心得体会，这样能够给人努力向前的动力。优质的心得体会该怎么样去写呢？接下来我就给大家介绍一下如何才能写好一篇心得体会吧，我们一起来看一看吧。

描写高压实验心得体会和方法一

法定地址：__________________

法定代表人：________________

委托代理人：________________

联系人：____________________

电话：______________________

传真：______________________

邮编：______________________

开户银行：__________________

帐号：______________________

税务登记号：________________

营业执照号：________________

组织机构代码号：____________

法定地址：__________________

法定代表人：________________

委托代理人：________________

联系人：____________________

电话：______________________

传真：______________________

邮编：______________________

电费开户银行：______________

帐号：______________________

税务登记号：________________

营业执照号：________________

组织机构代码号：____________

为明确供电企业和电力用户在电力供应与使用中的权利和义务，安全、经济、合理、有序地供电和用电，根据《中华人民共和国民法典》、 《中华人民共和国电力法》、 《电力供应与使用条例》和《供电营业规则》等法律、法规， 经双方协商一致，签订本合同，共同信守，严格履行。用方在订立本合同时已阅读并充分了解《上海市电力公司供电营业细则》有关内容，并同意遵守。

一、用电地址、用电类别：

1.用电地址：__________________

2.用电类别：(工业/非工业/农业/商业/宾馆)

3.用方休息日：________________

二、供电方式、用电容量及产权分界

1.供方向用方提供三相交流50hz 电源，采用(单/双/多)路电源向用方供电。

用方的正常运行方式：(二常互为备用/二常互不备用/二常一备/二常一保/一常一备/一路常用)

2.供电电源：

（1）常用电源

①供方以_____千伏_____线路，向用方变配电站供电。

②用电容量为_____伏安，其中受电变压器容量____伏安/台，_____千伏安/台；受电高压电动机____千瓦/台，______千瓦/台。

③供方与用方的产权分界点在____处，该分界点的紧固件属于(供方/用方) 产权分界点电源侧的资产属于供方； 产权分界点负荷侧的资产属于用方(但在用方的计费电能计量装置、负荷管理装置属供方资产)。附供电接线及产权分界示意图(附件一)。

（2）常用/备用电源

①供方以____千伏____线路，向用方变配电站供电。

②用电容量为____千伏安，其中受电变压器容量____千伏安/台，____千伏安/台；受电高压电动机_____千瓦/台，_____千瓦/台。

③供方与用方的产权分界点在_____处，该分界点的紧固件属于(供方/用方)产权分界点电源侧的资产属于供方；产权分界点负荷侧的资产属于用方(但在用方的计费电能计量装置、负荷管理装置属供方资产)。附供电接线及产权分界示意图。

（3）备用/保安电源

①供方以____千伏____线路， 向用方变配电站供电。

②用电容量为____千伏安， 其中受电变压器容量____千伏安/台，____千伏安/台电高压电动机____千瓦/台，_____千瓦/台。

③供方与用方的产权分界点在____处，该分界点的紧固件属于(供方/用方)，产权分界点电源侧的资产属于供方； 产权分界点负荷侧的资产属于用方(但在用方的计费电能计量装置、负荷管理装置属供方资产)附供电接线及产权分界示意图(详见附件一)

3.用方采取下列电或非电的保安措施，防止电网意外断电对安全生产产生的影响：

a.自备发电机/ups 千瓦，安装在供电电源与自各电源闭锁的联锁方式为(电气/机械)，用方不得自行改变或撤出联锁装置。

b.非电保安措施是________________ 。

4.常用电源与(常用/备用/保安电源之间不得并列运行，电源之间的联锁采用(电气/机械)联锁，并安装在_________，未经供方同意，用方不得自行改变或撤出联锁装置。

三、供电质量

1.在电力系统正常状况下，供方应按《供电营业规则》规定的电能质量标准向用方供电。

2.在电力系统正常运行的情况下，供方应向用方连续供电。但为了保障电力系统的公共安全和维护正常供电秩序，供方按规定事先通知的停电，用方愿意配合。

3.用方的功率因数应达到《供电营业规则》第四十一条规定，且谐波源负荷、冲击负荷、波动负荷、非对称负荷等对电能质量方必须产生的干扰与影响不得超过国家规定控制范围，否则积极采取措施使其达到国家规定的标准。

四、 用电计量

1.供方按国家规定的电价类别对每路电源分别安装用电计。用电计量装置的记录作为向用方结算电费的依据。

2.用电计量方式、计量装置参数如下：_____________

3.设在用方的用电计量装置和负荷管理装置的安装、移动、检验、拆除、加封及连接线等均由供方办理， 用方愿提上的方便， 并对用电计量装置负责保管。

供方应按规定对用电计量装置进行更换， 并按规定周期委

电源名称

供电电压/量电电压

(kv)

计量设备 规 格 精度(级) 计算倍率

有功电能表

无功电能表

ct

常用电源

pt

有功电能表

无功电能表

ct

常见/备用

电源

pt

有功电能表

无功电能表

ct

备用/保安

电源

pt

电能表强制检定站进行校验。用方发现用电计量装置有故障应及时通知供方， 由供方负责处理。用方认为供方装设的计电能表不准时，可按规定向电能表强制检定站提出校验申请。用方对检验结果有异议时，在接到检验结果后l 5 个工作日内，向上海市技术监督局申请检定。

五、电价及电费结算方式

1.计价依据及方式：

(1)供方根据物价管理部门批准的电价和用电计量装置的记录， 向用方定期结算电费。

在合同有效期内， 发生电价调整时， 按调价文件规定执行。

(2)计价方式：

a. 常用电源电费计算执行两部制分时电价及功率因数调整电费办法。基本电费按最大需量计算，电度电费按分时电度电价计算。备用电源执行单一制电价，电度电费按峰价计算。

b. 用方电费结算执行单一制电价及功率因数调整电费办法。功率因数调整电费考核标准为(0.9/o.85)。用方送入供方的无功电量视为吸收供方的无功电量计算月平均功率因数.申请，调整下月最大需量限额，供方在5 个工作日内应书面答复(超过5 个工作日末予答复的， 视作同意)， 若同意则按新限额计算。

2.电费结算方式

(1)供方应在每月 日定期抄表，并按期向用方收取电费。

(2)用方同意在收到缴费通知后 个工作日内全额交清电费。供方委托 银行向用方电费开户银行划拨电费。每月分三次划拨， 即每月6 日、16 日、26 日按全月电费的三分之一左右划拨， 并于次月6 日结清当月全部电费。根据需要， 双方可另行签订电费结算协议。

3.用方对用电计量、电费有争议时，同意先交清电费，然后双方协商解决。协商不成时则按照本合同第十条处理。

4.用方在交付逾期电费时，应首先支付违约金，扣除违约金后的剩余部分不足以付清欠费时，所欠部分电费从到期应付之日起继续计收违约金。

六、调度通讯

1. 双方均应执行《电网调度管理条例》的有关规定。双方约定:用方 设备由供方调度。根据需要， 双方可另行签订电力调度协议。

2.双方约定采用录音电话方式保持相互之间通讯联系:

供方电话(录音)：_________________

用方电话( ):_____________________

录音电话的内容作为分析事故的依据之一。

七、供电设施维护管理责任

1.双方按本合同第二条的产权分界各自负责设备的运行维护管理。

2.用方受电总开关继电保护装置应由供方整定、加封并按规定周期校验， 用方不得擅自更动。

3.除另有约定外，未经对方同意，不得操作和更动对方分管的供用电设施。如遇紧急情况(当危及电网和用电安全，或可能造成人身伤亡或设备损坏)时而必须操作的，事后应在2 小时内通知对方。

4.安装在用方的用电计量装置及电力负荷管理设备，由供方负责维护管理， 用方负责保护并监视其正常运行。如有异常，用方应及时通知供方。

5.在供用电设施上发生的法律责任，以供用电设施产权归属确定。双方应做好各自分管的供用电设施的运行维护管理工作，并依法承担相应的责任。

八、其他约定

1.为保证供电、用电的安全，供方按《用电检查管理办法》对用方的用电情况进行检查时，用方应予配合。用电检查人员

在执行查电任务时，应向用方出示《用电检查证》，用方应派员随同并配合检查。

2.用方应按期进行季节性安全检查和电气设备预防性试验，发现问题及时处理。发生用电电气事故时，应及时向供方报告。供方应参与事故的分析并协助用方制定防范措施。

3.按国家规定，供方应在用方处安装电力负荷管理装置，用方应予以配合。

4.用方在受电装置上作业的电工， 必须持有电力管理部门颁发的《电工进网作业许可证》。

5.用方对受电装置一次设备和保护控制装置进行改造或扩建时，应到供方处办理手续， 并经供方书面审核同意后方可实施。

6.用方安装不并网自备发电机组时，应具有防止在电网停电期间向电网倒送电的安全措施， 经供方同意后方可投入运行。用方安装并网自备发电机组的， 供用双方应根据有关规定另行签订《并网协议》。

7.用方需增加用电容量、变更用电(减容、暂停、暂换、迁址、移表、暂拆、分户、并户、销户、改压、改类、更名或过户)时，应事先到供方营业场所办理申请手续。

8.未经供方同意，用方不得自行向第三方转供或引入电源。用方在其用电地址内将部分土地、房屋出租或转让时，应通知承租人或受让人向供方办理用电申请手续， 并提供必要的供电通道或变配电站站址。

9.供、用电双方任何一方改变法定地址，电费开户银行、帐号、税务登记号时， 应于一周内书面告知另一方。

九、违约责任

1.供方违约责任

(1)供方未能依法按规定的程序事先通知用方停电给用方造成损失的，供方将按附件二承担赔偿责任。

(2)由于供方的责任引起电能质量超出标准规定，给用方造成损失的，供方将按附件二承担赔偿责任。

(3)供方的电力运行事故，给用方造成损失的，供方将按附件二承担赔偿责任。但对有下列况之一的， 供方不承担赔偿责任:

① 用方自身的过错;

② 多路电源供电只停其中一路电源，而其它电源仍可满足保安需要;

③ 用方有自各电源和非电保安措施;

④ 因电力运行事故引起开关跳闸，经自动重合闸装置重合成功;

⑤ 由于不可抗力引起电力运行事故。

2.用方违约责任

(1) 由于用方的责任造成供方对外停电，用方应按《供电营业规则》第九十五条有关规定承担赔偿责任，但不承担因供方责任便事故扩大部分的责任。

(2)由于用方的责任造成电能质量不符合标准时，对自身造成的损害，甘用方自行承担责任;对供方和其他用户造成损害的,用方应承担相应的损害赔偿责任。

(3)用方不按期支付电费的，应承担违约责任，违约金从逾期之日起按下列规定计算:

(4) 当年欠费部分，每日按欠费总额的千分之二计算;

(5) 跨年度欠费部分，每日按欠费总额的千分之三计算。

经供方催交，用方仍未付清电费的，供方可依法按规定程序停止部分或全部供电,并追收所欠电费和违约金，停电引起的损失由用方自行承担。

(6)用方愿遵守《电力供应与使用条例》第三十、第三十一条之规定。如有违反，供方将按《供电营业规则》有关规定对用方加收违约使用电费。

(7)用方违反其他约定第8 条之规定，擅自向第三方转供或引入电源，电网运行对第三方产生的一切风险由用方承担，且因转供或引入电源引起的供方损失也将由用方承担。

十、争议的解决方式

双方因履行本合同发生争议，应依本合同之原则协商和解。协商不成时，可以提请电力管理部门行政调解。本经调解或调解不成时，双方同意选择下列第____种方式解决:

1.向_______仲裁委员会提请仲裁

2.向签约地人民法院提起诉讼

十一、供电时间

a .已受电用户在本合同签约生效后，供方即依本合同向用方供电。

b .用方新建改建的受电装置经供方检验合格，且本合同生效后，供方即依本合同向用方供电。

十二、合同的变更和解除

1.本合同的变更和解除应按《供电营业规则》第九十四条办理。

2.在双方签订变更、解除合同的书面协议之前，本合同继续有效。

3.本合同有效期内，经双方协商同意的有关修改合同的合同书、信件和数据电文等也是本合同的组成部分。

十三、本合同效力及未尽事宜

1.本合同未尽事宜，按《中华人民共和国民法典》、《中华人民共和国电力法》、《电力供应与使用条例》、《供电营业规则》、《上海市电力公司供电营业细则》等有关规定协商解决。如遇国家法律、政策调整修改时，则按新规定执行。

2.本合同经双方签字并加盖公章后生效，此前双方签订的供用电合同或协议自行终止。

3.本合同一式____份， 双方各执_____份。

4.本合同的签约地为 。

5.本合同的附件包括：

a.附件一： 供电接线及产权分界示意图

b.附件二： 供电方违约赔偿办法

上述附件为本合同不可分割的组成部分。

供电人：（ 盖章）_________

签约人：（ 签章）_________

签约时间：____年___月___日

供电人：（ 盖章）_________

签约人：（ 签章）_________

签约时间：____年___月___日

附件一：

供电接线及产权分界示意图

附件二

供电方违约赔偿办法

1.因供用电合同中供方违约责任第（2）项原因造成用户方损失的，供方按用方在停电时间内可能用电量的电度电费5 倍(单一制电价为4 倍)赔偿。

用方在停电时间内的可能用电量按照停电前用方正常用电月份或正常用电一定天数内的每小时平均用电量乘以停电小时。

对停电责任的分析和停电时间及少供电量的计算，均按供电企业的事故记录及《电业生产事故调查规程》办理。停电时间不足l 小时按1 小时计算，超过1 小时按实际时间计算。

2.因供用电合同中供方违约责任第(3)项原因造成用方损失的,供方按用方在电压不合格的累计时间内所用的电量，乘以用方当月用电的平均电价的百分之二十给予赔偿。

电压变动超出允许变动幅度的时间以用方自备并经供电企业认可的电压自动记录仪表的记录为准,如用方未装此项仪表，则以供电企业的电压记录为准。

3.供电频率超出允许偏差，给用户造成损失的，供电企业应按用户每月在频率不合格的累计时间内所用电量，乘以当月用电的平均电价的百分之二十给予赔偿。

频率变动超出允许偏差的时间，以用户自备并经供电企业认可的频率自动记录仪表的记录为准，如用户未装此项仪表，则以供电企业的频率记录为准。

描写高压实验心得体会和方法二

1、石油化工的含义

石油化学工业简称为石油化工，是化学工业的主要组成部分，是指以石油和天然气为原料，生产石油产品和石油华工产品懂得加工工业。石油产品又称油品，主要包括各种燃料油(汽油煤油柴油)和润滑油液化石油气石油焦碳石蜡沥青等

2、石油化工的发展

石油化工的发展与石油炼制工业与以煤为基本原料生产化工产品及三大合成材料的发展有关。起源于19世纪20xx年代石油炼制的开始;20世纪20xx年代的汽车工业发展带动汽油的生产;40年代催化裂化工艺的进一步开发形成破具规模的石油炼制工艺;50年代裂化技术及乙烯的制取为石油化工提供大量原料;二战后石油化工得到更进一步的发展;70年代后原由价格上涨石油发展的速度下降。因此对新工艺的开发新技术的使用节能优化等的综合利用成为必然趋势。

3、石油化工的重大意义

石油化工作为我国的支柱产业，在国民经济中占有极高的地位。石油化工是燃料的主要供应者，是材料产业(包括合成材料有机合成化工原料)的支柱之一;促进农业的发展，如肥料制取塑料薄膜的推广及农药的使用等;对各工业部门起着至关重要的作用，如为我们提供汽油煤油柴油重油炼厂气等燃料，成为交通业(提供燃料)建材工业(提供塑料管道涂料等建材)及轻工纺织工业等领域。

石化行业是技术密集型产业，生产方法和生产工艺的确定关键设备的选型选用制造等一系列技术，都要求由专有或独特的技术标准所规定。因此只有加强基础学科尤其是有机化学，高分子化学，催化，化学工程，电子计算机和自动化等方面的研究，加强相关技术人员的培养，使之掌握和采用先进的科研成果，在配合相关的工程技术，石油化工行业才可能不断发展登上新台阶。

二、武汉石化厂简介

中国石化武汉石油化工厂始建于1971年。现有固定资产16亿元，炼油加工能力400万吨/年，拥有15套炼油、化工装置，为全国500家最大规模工业企业之一。黄鹤牌汽油、煤油、轻柴油、石脑油、硫磺、石油酸、聚丙烯、液化石油气等16种石油化工产品，有十种产品采用了国际标准，八种产品荣获部、省、市和国家优质产品称号。

(一)主要装置及流程

原油本身是由烃类和非烃类组成的复杂混合物，其直接利用价值较低，需要将其加工成汽油、煤油、柴油、润滑油以及石油化工产品。原油蒸馏是原油加工的第一道工序，在炼油厂中占有非常重要的地位。

目前炼油厂常采用的原油蒸馏流程是双塔流程或三塔流程。双塔流程包括常压蒸馏和减压蒸馏，三塔流程包括原油初馏、常压蒸馏和减压蒸馏。大型炼油厂一般采用三塔流程。

依据原油加工成产品的用途不同，原油的蒸馏工艺流程大致可分为三类：①燃料型，以生成汽油、煤油、柴油、减压馏分油以及重质燃料油为主;②燃料-润滑油型，以生成汽油、煤油、柴油、减压馏分油以及重质燃料油为主，对减压馏分油的分离精度要求较高，减压塔侧线馏分的馏程相对较窄;③化工型，以生成汽油、煤油、柴油、减压馏分油以及重质燃料油为主，汽油、煤油和部分柴油用作裂解原料，因此其分离精度要求较低。

上述三种类型的原油蒸馏流程基本相同，下面以燃料型来介绍原油蒸馏的基本流程，包括原油初馏、常压蒸馏和减压蒸馏三部分

(1)原油初馏原油经过换热，温度达到80～120℃左右进行脱盐、脱水(一般要求含盐小于10mg/l，含水小于0.5wt%)，再经换热至210～250℃，此时较轻的组分已经气化，气液混合物一同进入初馏塔，塔顶分出轻汽油馏分，塔底为拔头原油

(2)常压蒸馏拔头原油经过换热、常压炉加热至360～370℃，油气混合物一同进入常压塔(塔顶压力约为130～170kpa)进行精馏，从塔顶分出汽油馏分或重整馏分，从侧线引出煤油、轻柴油和重柴油馏分，塔底是沸点高于350℃的常压渣油。常压蒸馏的主要作用是从原油中分离出沸点小于350℃的轻质馏分油

(3)减压蒸馏常压渣油经过减压炉加热至390～400℃后进入减压塔，塔顶压力一般为1～5kpa。减压塔顶一般不出产品或者出少量产品(减顶油)，各减压馏分油从侧线抽出，塔底是常压沸点高于500℃的减压渣油，集中了原油中绝大部分的胶质和沥青质。减压蒸馏的主要作用是从常压渣油中分离出沸点低于500℃的重质馏分油和减压渣油(二)主要炼油工艺简介

a、联合车间

(一)常压蒸馏和减压蒸馏

常压蒸馏和减压蒸馏习惯上合称常减压蒸馏，常减压蒸馏基本属物理过程。原料油在蒸馏塔里按蒸发能力分成沸点范围不同的油品(称为馏分)，这些油有的经调合、加添加剂后以产品形式出厂，相当大的部分是后续加工装置的原料，因此，常减压蒸馏又被称为原油的一次加工。包括三个工序：原油的脱盐、脱水;常压蒸馏;减压蒸馏。

原油的脱盐、脱水又称预处理。从油田送往炼油厂的原油往往含盐(主要是氯化物)、带水(溶于油或呈乳化状态)，可导致设备的腐蚀，在设备内壁结垢和影响成品油的组成，需在加工前脱除。常用的办法是加破乳剂和水，使油中的水集聚，并从油中分出，而盐份溶于水中，再加以高压电场配合，使形成的较大水滴顺利除去。 催化裂化是在热裂化工艺上发展起来的。是提高原油加工深度，生产优质汽油、柴油最重要的工艺操作。原料范主要是原油蒸馏或其他炼油装置的350 ~ 540℃馏分的重质油，催化裂化工艺由三部分组成：原料油催化裂化、催化剂再生、产物分离。催化裂化所得的产物经分馏后可得到气体、汽油、柴油和重质馏分油。有部分油返回反应器继续加工称为回炼油。催化裂化操作条件的改变或原料波动，可使产品组成波动。

催化重整(简称重整)是在催化剂和氢气存在下，将常压蒸馏所得的轻汽油转化成含芳烃较高的重整汽油的过程。如果以80~180℃馏分为原料，产品为高辛烷值汽油;如果以60~165℃馏分为原料油，产品主要是苯、甲苯、二甲苯等芳烃，重整过程副产氢气，可作为炼油厂加氢操作的氢源。重整的反应条件是：反应温度为490~525℃，反应压力为1~2兆帕。重整的工艺过程可分为原料预处理和重整两部分。 加氢裂化是在高压、氢气存在下进行，需要催化剂，把重质原料转化成汽油、煤油、柴油和润滑油。加氢裂化由于有氢存在，原料转化的焦炭少，可除去有害的含硫、氮、氧的化合物，操作灵活，可按产品需求调整。产品收率较高，而且质量好。 延迟焦化是在较长反应时间下，使原料深度裂化，以生产固体石油焦炭为主要目的，同时获得气体和液体产物。延迟焦化用的原料主要是高沸点的渣油。延迟焦化的主要操作条件是：原料加热后温度约500℃，焦炭塔在稍许正压下操作。改变原料和操作条件可以调整汽油、柴油、裂化原料油、焦炭的比例。

原油一次加工和二次加工的各生产装置都有气体产出，总称为炼厂气。就组成而言，主要有氢、甲烷、由2个碳原子组成的乙烷和乙烯、由3个碳原子组成的丙烷和丙烯、由4个碳原子组成的丁烷和丁烯等。它们的主要用途是作为生产汽油的原料和石油化工原料以及生产氢气和氨。发展炼油厂气加工的前提是要对炼厂气先分离后利用。炼厂气经分离作化工原料的比重增加，如分出较纯的乙烯可作乙苯;分出较纯的丙烯可作聚丙烯等。

(二)、催化裂化装置

催化裂化工艺在石油炼制工业中占有十分重要的地位，在技术和经济上有许多优越性，是用于二次加工生产高质量燃料油的主要手段。

催化裂化装置是炼油工业的核心装置，与大乙烯裂解装置、大化肥合成氨装置同列为中国石化总公司的三大支柱装置。从经济效益看，它占总公司利税的30%左右，从加工能力看，占总公司原油加工能力的1/3。

催化裂化装置包括三大反应过程：反应再生过程、分馏过程、吸收稳定过程。

反应再生过程

催化裂化反应是指大分子的烃类在一定的温度和压力条件下，在微球催化剂的孔道内进行化学键的断裂反应，从而生成小分子烃类(但同时也生成焦炭)的化学反应。包括重油催化与常规蜡油催化。催化裂化操作参数包括反应温度、剂油比、原料预热温度、反应时间、再生催化剂含碳量等。

分馏过程

催化裂化反应油气的分离是在分馏塔内完成的，反应油气进入分馏塔的脱过热段(人字挡板下)，与人字挡板上下流的循环油浆逆流接触，脱除过热、洗涤油气中夹带的催化剂粉尘，并使反应油气进行部分冷凝。首先冷凝的是沸点较高的油浆，上升的油气混合物在塔内令其温度逐渐降低，又出现部分冷凝，冷凝液为回炼油。再降低温度使其逐渐部分冷凝为柴油，最后不能冷凝的是汽油、蒸气及富气。此时，在分馏塔底得到的是最高沸点馏分(油浆)，塔侧自下而上可取得回炼油、轻柴油馏分，自塔顶在油气分离罐底可取得汽油馏分，在分离罐顶得到富气组分。

吸收稳定过程

吸收是利用混合气体中各组分在液体中的溶解度不同达到分离的目的，而分馏是利用液体混合物中各组分挥发度不同来进行分离的

催化裂化压缩富气吸收过程是在填料塔内进行，解吸分离是在板式塔内进行。在吸收塔内，贫吸收油自塔顶入塔后下行，与由塔最下层塔板进塔而上升的烃类混合气体在塔板上进行多次气、液逆向接触，完成吸收过程。通过吸收和解吸操作，使吸收塔顶得到基本不含c3组分的气体(再吸收塔顶为干气);在解吸塔底得到基本不含c2的脱乙烷汽油。从而按c2、c3这两种关键组分将其分离开来。

稳定塔

将液化气(c3、c4)从脱乙烷汽油中分离出来的操作过程是在稳定塔中进行的。稳定塔操作是在压力下精馏分离液态烃和汽油的过程。

描写高压实验心得体会和方法三

（1）了解培养基的配置原理和方法，掌握分离培养微生物的有关准备工作。

（2）掌握高压灭菌方法及原理

（1）培养基的制备原理：

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

从营养角度分析：

营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等；?适宜的酸碱度(ph值)和一定缓冲能力；?一定的氧化还原电位；?合适的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反复融化，其凝固性降低。

（2）湿热灭菌原理－高压蒸汽灭菌

在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温

度也随之增加。在0.1mpa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

实验材料与方法

配制培养基所需器材

实验设备：高压蒸汽灭菌器。

实验器材：500ml三角烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、

称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐、平皿、剪刀等。

培养基等集中放讲台前高压桶内，送到洗刷室统一高压灭菌条件及注意事项

高压灭菌条件：121.3℃，15min。含糖培养基113℃，15min。

倒平板电炉加热灭菌好的培养基打开平皿包装倒平板（10块）注意事项：空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）。

a.在酒精灯火焰处，倾斜打开瓶口。

b.瓶口要过火焰。

c.左手掀开平皿小口。

d.倾注满皿底再多一点，约10ml（7cm直径平皿）。

e.推放一边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。

f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4℃备用。

（1）如何证明培养基灭菌是否彻底?

把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好；如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落，可能是摆放的太紧，导致蒸汽不畅，或锅的结构不合理等原因所致，应根据上述情况进行改进；如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，应提高压力或延长灭菌时间。经过几次检验都证明能彻底灭菌后，以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。

经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。

（2）为什么说消毒与灭菌是微生物学和临床医学必不可少的基本知识?由于病原生物广泛存在于自然界，可通过不同途径和媒介进入人体，引起感染或造成疾病流行。因此，杀灭或清除存在于体外传播媒介上的病原生物，对于切断传播途径、预防和控制其感染具有重要意义。自古以来，人们就利用煮沸、火烧、日晒等方法杀灭或去除微生物，达到预防疾病的目的。实际上，除了在临床医疗实践中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物学实验室、食物保存、饮水净化、药品与生物制品生产等过程中都需要避免微生物的污染。

接种是微生物实验及科学研究中一项基本操作技术。根据实验目的和要求，

选择合适的接种工具与接种方法，接种工具有接种环、接种针、接种铲、接种钩、吸管、滴管、棉签等。常用接种方法有：斜面接种，液体接种，穿刺接种，平板接种和固体接种。接种的关键是无菌操作。

无菌操作的原则：在酒精灯火焰旁进行，所有器皿均须严格消毒，培养基应事先做无菌试验，

接种工具使用前后须经火焰烧灼灭菌，棉塞不能乱放，始终夹在手指中。在培养四大类微生物时应注意选择适宜的培养条件。多数细菌为专性需氧菌与兼性需氧菌，少数为厌氧菌。多数食品腐败菌和工业用菌种，以及人和动物病原菌的最适生长温度为37℃，并且在近中性（ph6.5～7.5）条件下生长良好。多数放线菌为好氧菌，少数为厌氧菌，最适生长温度为28～30℃，多数适宜在偏碱性环境中生长（ph7.5～8.5）。

（1）实验材料：实验设备：温箱。

实验器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假丝酵母、新生隐球酵母菌、细黄链霉菌、pda平板、高盐察氏平板、高氏合成i号平板、塑料筐、20%甘油水溶液、镊子、接种铲、无菌盖玻片、无菌滤纸、无菌载玻片、石棉网、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐等。

（2）实验方法：平板接种：毛霉→pda平板（点植法）

啤酒酵母→pda平板（五区分离划线法）青霉、曲霉→pda平板（连续划线法）

1、取灭菌后小室平皿。

2、取无菌pda琼脂薄层平板，用镊子夹住盖玻片切割成0.5～1.0cm2的琼脂块，并将其移至培养小室中的载玻片上，制作过程注意无菌。

3、用接种环取少量霉菌的孢子接种于培养基四周，用无菌镊子

将盖玻片覆盖在琼脂块上，并(转载于:l灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，标记，置28～30℃培养3～5d

1.取粮食样品20g,放入无菌烧杯，加无菌水洗涤，

反复10次，弃去水后，将粮粒倒于平皿内备用2.镊子取粮食种入pda琼脂内，每皿可接种5-10粒。

放线菌的接种：取细黄链霉菌划线法接种，在接种的划线处，无

菌操作斜插入盖玻片数张。

1.空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）

2.在酒精灯火焰处，倾斜打开瓶口。

3.接种环使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可。

4.接种环使用后，先在火焰周围把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。5.金属杆快速通过火焰2－3次，杀灭表面微生物

1、粮食中产毒真菌的种类及产生毒素？

青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、细黄链霉菌（放线菌）青霉素、丝生毛霉素、黄曲霉素、根霉素、白念菌素。细黄链菌素

2、常用霉菌培养基有哪些？

马铃薯蔗糖培养基

豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基察氏培养基

3、霉菌的接种方法有何不同？为什么？

（1）连续划线法（青霉、曲霉）

青霉与曲霉为局限性生长的霉菌。应采用连续划线接种法接种。（2）点植法（根霉、毛霉）

根霉与毛霉生长区域比较大，应采用点植法。（3）小室载玻片培养法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）

实验三霉菌的制片与形态观察

实验目的：学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；

了解四类常见霉菌的基本形态特征。了解放线菌的基本形态特征。

实验原理：霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为3-10μm）,常是细

菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液，用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易干燥，能保持较长时间，能防止孢子四处飞散，棉兰具有一定的染色作用，染液的蓝色能增大反差。

（一）菌种：在马铃薯琼脂平板上培养3—4天的青霉(penicilliumsp.)、曲霉(aspergillussp.)、毛霉（mucorsp.）、根霉；

（二）器材及用具：镊子、载玻片、盖玻片、显微镜。

（一）直接制片观察

于洁净载玻片上，用镊子取霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝，然后小心地盖上盖玻

片。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜（二）小室培养观察

将载玻片直接放低倍镜下观察，再换高倍镜观察。

观察原则：

毛霉：用低倍镜观察孢子囊梗、囊轴等。用高倍镜观察孢子囊孢子的形

状、大小。

根霉：菌丝、孢子同毛霉，注意观察有无假根。

曲霉：在高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子着生位置，辨认分生孢

子梗、顶囊、小梗和分生孢子。

青霉：在高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生

孢子的形状等。实验结果：

分析与讨论：

青霉和曲霉的形态有哪些异同？

青霉常分布在霉腐变质的水果、蔬菜、粮食和皮革等物体上，菌体直立菌丝的顶端长有扫帚状的结构，结构的每一个分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青绿色，进行孢子生殖。

曲霉广泛分布在谷物、空气和土壤中，曲霉直立菌丝的顶端膨大成球状，球状结构的表面放射状地生有成串的孢子，孢子随曲霉种类的不同而呈黄色、橙色或黑色。

从皮肤取材查真菌如何检查？

描写高压实验心得体会和方法四

辉光球发光是低压气体(惰性气体)在高频电场中的放电现象。 辉光球外表为高强度玻璃球壳，球内充有稀薄的惰性气体(如氩气等)，中央有一个黑色球状电极。球的底部有一块振荡电路板，通过电源变换器，将低压直流电转变为高压高频电流加在电极上。通电后，振荡电路产生高频电场，球内稀薄气体由于受到高频电场的电离作用而光芒四射。辉光球工作时，在球中央的电极周围形成一个类似于点电荷的场。当用手(人与大地相连)触及球时，球周围

的电场、电势分布再均匀对称，故辉光球在手指的周围处变得更为明亮，产生的弧线顺着手的触摸移动而游动扭曲，随手指移动起舞。这其实是分子的激发，碰撞、电离、复合的物理过程。人体为另一电极，气体在极间电场中电离、复合而发生辉光。

辉光球通电后呈静止样。当人手触摸时中间电极出现放电致球壳触摸处。五颜六色的闪电会随着手的移动而移动，球内出现放电现象。一旦手离开，闪电消失。

霓虹灯，把直径为12-15毫米的玻璃管弯成各种形状，管内充以数毫米汞柱压力的氖气或其他气体，每1米加约1000伏的电压时，依管内的充气种类，或管壁所涂的荧光物质而发出各种颜色的光，多用此作为夜间的广告等。

日光灯，亦称“荧光灯”。一种利用光质发光的照明用灯。灯管用圆柱形玻璃管制成，实际上是一种低气压放电管。两端装有电极，内壁涂有钨酸镁、硅酸锌等荧光物质。制造时抽取空气，充入少量水银和氩气。广泛用于生活和工厂的照明光源。

还有一种是氙灯，氙灯是一种高辉度的光源。它的颜色成分与日光相近故可以做天然色光源、红外线、紫外线光源、闪光灯和点光源等，应用范围很广。

人体辉光，疾病辉光，爱情辉光，意识体能辉光，“人体辉光监控”。

描写高压实验心得体会和方法五

通过演示来了解弧光放电的原理

给存在一定距离的两电极之间加上高压，若两电极间的电场达到空气的击穿电场时，两电极间的空气将被击穿，并产生大规模的放电，形成气体的弧光放电。

雅格布天梯的两极构成一梯形，下端间距小，因而场强大(因)。其下端的空气最先被击穿而放电。由于电弧加热（空气的温度升高，空气就越易被电离,击穿场强就下降），使其上部的空气也被击穿，形成不断放电。结果弧光区逐渐上移，犹如爬梯子一般的壮观。当升至一定的高度时，由于两电极间距过大，使极间场强太小不足以击穿空气，弧光因而熄灭。

打开电源，观察弧光产生。并观察现象。（注意弧光的产生、移动、消失）。

两根电极之间的高电压使极间最狭窄处的电场极度强。巨大的电场力使空气电离而形成气体离子导电，同时产生光和热。热空气带着电弧一起上升，就象圣经中的雅各布（yacob以色列人的祖先)梦中见到的天梯。

演示器工作一段时间后，进入保护状态，自动断电，稍等一段时间，仪器恢复后可继续演示，

举例说明电弧放电的应用

描写高压实验心得体会和方法六

流感病毒颗粒表面的血凝素（ha）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，ha试验由此得名。ha蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰ha蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。

该试验是目前who进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株ha亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。

只有当抗原和抗体ha亚型相一致时才能出现hi现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。

1  阿氏（alsevers）液配制

称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml，散热溶解后调ph值至6.1，

69kpa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kpa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。

2  10%和1%鸡红细胞液的制备

2.1采血

用注射器吸取阿氏液约1ml（3.8%枸橼酸钠），取至少2只spf鸡（如果没有spf鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4ml，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10ml阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞

将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 ml（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

2.3  10%鸡红细胞悬液

取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(ml)，加入9倍体积(ml)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步

可省略，直接配制1%红细胞）

2.4  1%鸡红细胞液

取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 ml，加入9 ml生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）

3 抗原血凝效价测定（ha试验，微量法）

3.1 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl pbs（生理盐水），换滴头。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。

3.3从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。

3.4每孔再加入25μl pbs（生理盐水）。

3.5每孔均加入25μl 体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。

3.6振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。

3.7结果判定  将板倾斜，观察血凝板，判读结果。

能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（hau）。注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。

4 血凝抑制（hi）试验（微量法）

4.1 根据3的试验结果配制4hau的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4hau的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4hau抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。

4.2 在微量反应板的1孔～11孔加入25μl pbs（生理盐水），第12孔加入50μl pbs（生理盐水）。

4.3 吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。

4.4 1孔～11孔均加入含4hau抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。

4.5 每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。

4.6 结果判定

试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。

以完全抑制4hau抗原的血清最高稀释倍数作为hi滴度。

hi价小于或等于31og2判定hi试验阴性；hi价大于或等于41og2为阳性。

1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对re-4和re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。

同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的hi效价较高。

2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。

3、反应温度不能太高。若在37℃ （如温箱）下进行，